當(dāng)前位置：
鄂公網(wǎng)安備 42018502005592號(hào)
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其它名稱(chēng)： OVCAR-8/ADR
產(chǎn)品編號(hào)： CL-591h
價(jià)格： ￥2500
產(chǎn)品編號(hào)：CL-591h
細(xì)胞介紹
OVCAR-8/ADR為由OVCAR-8細(xì)胞構(gòu)建的耐ADR藥物細(xì)胞株。
細(xì)胞特性
來(lái)源：高級(jí)別卵巢漿液性腺癌 女 64歲
形態(tài)：上皮樣 貼壁生長(zhǎng)
含量：>1x10?cells
規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
用途：僅供科研使用
細(xì)胞運(yùn)輸、保存及注意事項(xiàng)
復(fù)蘇細(xì)胞 | 凍存細(xì)胞 | |
包裝 | 充液的T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 1mL凍存管 |
運(yùn)輸條件 | 常溫 | 干冰 |
保存方式 | 75%酒精消毒瓶壁，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱 | -80℃冰箱中保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮/立即復(fù)蘇 |
注意事項(xiàng) | ① 收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們； ② 請(qǐng)?jiān)?/span>4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，10X和20X各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)； ③ 貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收； ④ 運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶 1：2傳代。 | |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
完全培養(yǎng)基 | 1640培養(yǎng)基+優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%+ 雙抗1% |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%；溫度：37℃；培養(yǎng)箱濕度為70%-80% |
凍存液 | 90%血清 + 10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配 |
1）ADR藥物的配制及保存
建議將ADR藥物配制成1mg/mL的母液，即使用10mL PBS溶液溶解10mg ADR藥物，使其完全溶解后，使用0.22um濾器過(guò)濾除菌。
注意：可根據(jù)用量配置藥物，并將藥物分裝保存，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致藥物失效。溶解后的Taxol，4℃保存1周，-20℃保存1個(gè)月，-80℃保存6個(gè)月。
2）凍存液的配制
90%優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。（凍存液中不含藥物）
3）完全培養(yǎng)基的配制（推薦使用CM-591h）
成分 | 體積/濃度 |
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 | 10% |
雙抗 | 1% |
500ng/mL ADR | 0.05%母液（1mg/mL） |
RPMI-1640培養(yǎng)基 | 補(bǔ)充至所需體積 |
細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存操作
（一）細(xì)胞復(fù)蘇
① 新制 100mm 平皿 1個(gè)，含 12mL 上述培養(yǎng)液；
② 凍存管從液氮或-80℃中取出，37℃水浴 1~2min,待完全溶解后盡快移入安全柜復(fù)蘇；
③ 用無(wú)菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，順時(shí)針搖勻；
④ 放入（37℃，5%CO2）培養(yǎng)箱中，過(guò)夜換液，2-4天長(zhǎng)滿(mǎn)。
注意：建議復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩，避免凍存管處于溫差較大情況下發(fā)生爆炸造成人員傷害。
（二）細(xì)胞傳代
將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入2mL（/100mm皿/T25瓶）胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA），在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時(shí)，吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約1min取出。傳代用6mL培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可1:2傳代。
（三）細(xì)胞凍存:
凍存則用3mL凍存液（90% FBS+ 10% DMSO）終止消化，吹打均勻，分為3支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存。
注意事項(xiàng)
所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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