人神經(jīng)元分化試劑盒說(shuō)明書(貼壁)

貨號(hào)：YD-006

規(guī)格：1 KIT

儲(chǔ)存條件：基礎(chǔ)培養(yǎng)基2～8℃,添加劑-80～-20℃;混勻后2～8℃,4周內(nèi)使用完畢。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

人神經(jīng)元分化培養(yǎng)試劑盒是由賽奧斯生物（SAIOS）研發(fā)的，可以將人神經(jīng)干細(xì)胞高效分化至神經(jīng)元的相關(guān)試劑。

產(chǎn)品內(nèi)容：

需要材料：

人神經(jīng)元分化接種培養(yǎng)基

人神經(jīng)元分化維持培養(yǎng)基

細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)無(wú)鈣鎂的PBS溶液

人神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）消化液

人神經(jīng)元分化鋪底工作液

培養(yǎng)材料準(zhǔn)備：

l人神經(jīng)元分化接種完全培養(yǎng)基：在室溫解凍神經(jīng)元分化接種添加劑，吹打混勻，隨后將1mL添加劑加入50mL神經(jīng)元分化接種基礎(chǔ)培養(yǎng)基形成完全培養(yǎng)基。 NeuroEasy人神經(jīng)元分化接種完全培養(yǎng)基可在2 8℃穩(wěn)定儲(chǔ)存4周。

l人神經(jīng)元分化維持完全培養(yǎng)基：在室溫解凍神經(jīng)元分化維持添加劑，吹打混勻，隨后將5mL添加劑加入250mL神經(jīng)元分化維持基礎(chǔ)培養(yǎng)基形成完全培養(yǎng)基。NeuroEasy人神經(jīng)元分化維持完全培養(yǎng)基可在2 8℃穩(wěn)定儲(chǔ)存4周。

注：添加劑室溫解凍，可按實(shí)際用量對(duì)添加劑進(jìn)行分裝，分裝后重新置于-80～-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

l將人神經(jīng)元分化鋪底工作液置于4度冰箱化凍備用。

神經(jīng)元分化：

1. 提前一天用NeuroEasy人神經(jīng)元分化鋪底工作液包備培養(yǎng)皿，放置于37℃恒溫二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱中過(guò)夜。

2. 顯微鏡下觀察，選擇狀態(tài)較好的貼壁神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行分化。

3. 室溫平衡人神經(jīng)元分化接種完全培養(yǎng)基。

4. 吸去培養(yǎng)皿中上清液，加入無(wú)鈣鎂的PBS清洗培養(yǎng)皿。

5. 棄上清，加入人貼壁神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁）消化液，37℃培養(yǎng)箱消化5-15分鐘，細(xì)胞變圓時(shí)可終止消化。

6. 取出培養(yǎng)皿，加入等體積神經(jīng)元分化接種完全培養(yǎng)基終止消化，用移液器將貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)，收集于15m離心管中。

7. 1000rpm離心5分鐘。

8. 棄上清，在離心管中加入適量神經(jīng)元分化接種完全培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞按細(xì)胞貼壁后5-10%匯合度接種。

9. 37℃恒溫二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。

10. 顯微鏡下觀察細(xì)胞貼壁，棄上清，更換為神經(jīng)元分化維持培養(yǎng)基。

11. 37℃恒溫二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，每 3 天更換神經(jīng)元分化維持培養(yǎng)液一次。

12. 大約培養(yǎng) 8 10 天左右，顯微鏡下可觀察到神經(jīng)元細(xì)胞。

13. 長(zhǎng)期培養(yǎng)可得到成熟神經(jīng)元。