Nb2-11 大鼠淋巴瘤細胞

產(chǎn)品編號：CL-054r

一、細胞特性

形態(tài)：淋巴母細胞樣，圓形，單個細胞，多數(shù)聚團，懸浮生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/ 含有1mL細胞懸液的凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

二、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 該細胞完全培養(yǎng)基為：89%DMEM-H＋10%FBS＋1%NEAA

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃，95% Air，5% CO?

3) 凍存液：推薦使用非程序無血清細胞凍存液（貨號：RC-0102）

三、收貨注意事項

1) 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細胞有污染，凍存細胞若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落，請拍照后及時與我們聯(lián)系。

2) 75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2—3h，在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2—3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3) 對于貼壁生長的細胞：在無菌條件下，將培養(yǎng)瓶的全部內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到離心管中，在125 x g轉(zhuǎn)速下離心 5-10 min 后重懸細胞，轉(zhuǎn)移懸浮細胞到新的 T25 瓶中，補加完全培養(yǎng)基到 10mL，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)操作步驟

一、細胞復蘇

1. 將細胞凍存管快速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃加速溶解，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內(nèi)容物加入含有9mL完全培養(yǎng)基的離心管中，1000-1200rpm離心5min。

3. 棄去上清液，用1—2mL完全培養(yǎng)基重懸細胞，加入含有6—7mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（培養(yǎng)瓶建議豎著培養(yǎng)）。

4. 第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意：在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和佩戴防護面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細胞傳代

① 離心法：收集細胞，1000rpm條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1—2mL培養(yǎng)液后吹勻，將 細胞懸液按1:2 的比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的T25瓶中。

② 半量換液法：可選用半換液方式，將T25瓶子豎起來，輕輕拍打兩下，在培養(yǎng)箱靜置10分鐘，肉眼可見大部分細胞沉在底部，輕輕吸去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2的比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的T25瓶中。

③ 注意培養(yǎng)基 pH 值變化和細胞密度，定期換液（每周 2-3 次），待細胞密度達到大于2×10?個/mL 時，重復傳代操作或者凍存。

三、細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。步驟如下：

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/mL。

2. 1000rpm離心3—5min，去掉上清，用細胞凍存液重懸細胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞放入-80℃冰箱中，24h后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。