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人神經元分化試劑盒說明書(貼壁)
貨號：YD-006
規(guī)格：1 KIT
儲存條件：基礎培養(yǎng)基2～8℃,添加劑-80～-20℃;混勻后2～8℃,4周內使用完畢。
產品簡介：
人神經元分化培養(yǎng)試劑盒是由賽奧斯生物（SAIOS）研發(fā)的，可以將人神經干細胞高效分化至神經元的相關試劑。
產品內容：
組份代碼 | 名稱 | 規(guī)格 | 數量 |
YD-006-1 | 人神經元分化接種基礎培養(yǎng)基 | 50mL | 1 瓶 |
YD-006-2 | 人神經元分化接種添加劑 | 1mL | 1 支 |
YD-006-3 | 人神經元分化維持基礎培養(yǎng)基 | 250mL | 1 瓶 |
YD-006-4 | 人神經元分化維持添加劑 | 5mL | 1 支 |
YD-006-5 | 人神經干細胞(貼壁培養(yǎng))消化液 | 50mL | 1 瓶 |
YD-006-6 | 人神經元分化鋪底工作液 | 20mL | 1瓶 |
需要材料：
人神經元分化接種培養(yǎng)基
人神經元分化維持培養(yǎng)基
細胞培養(yǎng)級無鈣鎂的PBS溶液
人神經干細胞（貼壁培養(yǎng)）消化液
人神經元分化鋪底工作液
培養(yǎng)材料準備：
l人神經元分化接種完全培養(yǎng)基：在室溫解凍神經元分化接種添加劑，吹打混勻，隨后將1mL添加劑加入50mL神經元分化接種基礎培養(yǎng)基形成完全培養(yǎng)基。 NeuroEasy人神經元分化接種完全培養(yǎng)基可在2 8℃穩(wěn)定儲存4周。
l人神經元分化維持完全培養(yǎng)基：在室溫解凍神經元分化維持添加劑，吹打混勻，隨后將5mL添加劑加入250mL神經元分化維持基礎培養(yǎng)基形成完全培養(yǎng)基。NeuroEasy人神經元分化維持完全培養(yǎng)基可在2 8℃穩(wěn)定儲存4周。
注：添加劑室溫解凍，可按實際用量對添加劑進行分裝，分裝后重新置于-80～-20℃保存，避免反復凍融。
l將人神經元分化鋪底工作液置于4度冰箱化凍備用。
神經元分化：
1. 提前一天用NeuroEasy人神經元分化鋪底工作液包備培養(yǎng)皿，放置于37℃恒溫二氧化碳細胞培養(yǎng)箱中過夜。
12 孔板 | 6 孔板 | |
鋪底工作液 | 0.5mL | 1mL |
2. 顯微鏡下觀察，選擇狀態(tài)較好的貼壁神經干細胞進行分化。
3. 室溫平衡人神經元分化接種完全培養(yǎng)基。
4. 吸去培養(yǎng)皿中上清液，加入無鈣鎂的PBS清洗培養(yǎng)皿。
5. 棄上清，加入人貼壁神經干細胞（貼壁）消化液，37℃培養(yǎng)箱消化5-15分鐘，細胞變圓時可終止消化。
6. 取出培養(yǎng)皿，加入等體積神經元分化接種完全培養(yǎng)基終止消化，用移液器將貼壁細胞吹打下來，收集于15m離心管中。
7. 1000rpm離心5分鐘。
8. 棄上清，在離心管中加入適量神經元分化接種完全培養(yǎng)基，重懸細胞按細胞貼壁后5-10%匯合度接種。
9. 37℃恒溫二氧化碳細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。
10. 顯微鏡下觀察細胞貼壁，棄上清，更換為神經元分化維持培養(yǎng)基。
11. 37℃恒溫二氧化碳細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，每 3 天更換神經元分化維持培養(yǎng)液一次。
12. 大約培養(yǎng) 8 10 天左右，顯微鏡下可觀察到神經元細胞。
13. 長期培養(yǎng)可得到成熟神經元。
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