NCI-H209 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

產(chǎn)品編號：CL-654h

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞由Gazdar AF及其同事于1979年從一名小細(xì)胞肺癌患者的骨髓轉(zhuǎn)移灶中分離建立（也稱為 H-209），該骨髓標(biāo)本的獲取先于患者的治療。該細(xì)胞是一種典型的小細(xì)胞性肺癌細(xì)胞，表達(dá)較高水平的4種生化標(biāo)志：神經(jīng)特異性烯醇、肌酸激酶腦型同工酶、左旋多巴脫羧酶、鈴蟾肽樣免疫活性。c-myc DNA序列沒有擴(kuò)增；未發(fā)現(xiàn)大的結(jié)構(gòu)DNA的異常；該細(xì)胞合成與正常肺相當(dāng)量的p53 mRNA。該細(xì)胞以聚集體的形式懸浮生長，只有聚集體中的細(xì)胞是有活力的，但是細(xì)胞活率無法估計，一般培養(yǎng)基中含有大量的細(xì)胞碎片。。

細(xì)胞特性

來源：男 小細(xì)胞肺癌患者的骨髓中提取

形態(tài)：球形成聚集體，懸浮生長，有少數(shù)細(xì)胞疏松貼壁

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

用途：僅供科研使用

細(xì)胞運輸、保存及注意事項

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存操作

（一）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4~6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm/min離心3~5min，棄去上清液。加入1mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，均勻鋪于含6~8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。

注意：建議復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩，避免凍存管處于溫差較大情況下發(fā)生爆炸造成人員傷害。

（二）細(xì)胞傳代

①　待細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

②　棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次，吸凈殘余的PBS。

③　加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），顯微鏡下觀察細(xì)胞大部分變圓并脫落，即可輕拍培養(yǎng)瓶至細(xì)胞全部脫落。迅速拿回操作臺，加入2倍體積的、含10%FBS的培養(yǎng)基終止消化。

④　將細(xì)胞懸液移入離心管中，1000rpm/min離心3-5min，棄去上清液。

⑤　向細(xì)胞沉淀中加入1~2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，輕吹混勻。將細(xì)胞懸液按1：1比例均勻鋪于2個新的培養(yǎng)瓶/皿中，添加6~8mL完全培養(yǎng)基，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

（三）細(xì)胞凍存

①　細(xì)胞凍存時，步驟同細(xì)胞傳代的①~④，細(xì)胞計數(shù)后，加入配制好的細(xì)胞凍存液，重懸細(xì)胞，按照1×106 ~ 1×107個細(xì)胞/mL分配到一個凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

②　將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。