LLC-WRC 256 大鼠腹水癌細(xì)胞

產(chǎn)品編號：CL-070r

一、細(xì)胞簡介

Walker 256是一株大鼠腹水癌細(xì)胞系。該細(xì)胞注入大鼠腹腔能快速形成腹水瘤，是研究抗腫瘤藥物體內(nèi)模型的極好材料。

二、細(xì)胞特性

來源：大鼠 腹水

形態(tài)：淋巴母細(xì)胞，懸浮生長

含量：1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

三、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 完全培養(yǎng)基：RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃；95%Air，5%CO?；濕度為70%～80%

3) 凍存液：推薦使用非程序無血清細(xì)胞凍存液（貨號：RC-0102）

四、收貨注意事項

1) 收到細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細(xì)胞有污染，凍存細(xì)胞若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落，請拍照后及時與我們聯(lián)系。

2) 75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于培養(yǎng)箱靜置約2—3h。在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2—3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時提供收到細(xì)胞時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3) 對于懸浮生長的細(xì)胞：靜置后，抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞，1000rpm離心5分鐘，棄去上清，重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。

細(xì)胞培養(yǎng)操作說明

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1. 將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管快速放入37℃水浴中，搖晃凍存管加速解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內(nèi)容物加入含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，用1—2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種到含有6—8mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

注意：在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和佩戴防護(hù)面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)80%～90%，即可進(jìn)行傳代

懸浮狀態(tài)下生長的細(xì)胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長狀態(tài)，一般情況下細(xì)胞密度維持在1×10?~1×10?個/mL（不同細(xì)胞對密度要求不同）可以維持細(xì)胞的正常生長。

如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1—2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中，添加6—8mL新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

三、細(xì)胞凍存

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。步驟如下：

1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL。

2. 1000rpm離心3—5min，去掉上清，用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL分配到一個凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞放入-80℃冰箱中，24h后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。