HULEC-5a 人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞

產(chǎn)品編號：CL-015h

一、細(xì)胞特性

來源：人正常肺組織

形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣，貼壁生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運(yùn)輸）/2mL凍存管x2（干冰運(yùn)輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

二、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 該細(xì)胞完全培養(yǎng)基為：HULEC-5a專用培養(yǎng)基。

2) 培養(yǎng)條件：氣相：5%CO?+95%AIR；溫度：37℃；培養(yǎng)箱濕度：70%-80%。

3) 凍存液：90%血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟

一、細(xì)胞復(fù)蘇

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心3-5分鐘，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

注意：建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩，避免凍存管因溫差變化發(fā)生爆炸造成人員傷害。

二、細(xì)胞傳代

細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%時，即可進(jìn)行傳代，步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4mL含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3. 輕輕打勻后吸出，1000rpm離心3-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1~2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2比例分到2個新的培養(yǎng)瓶中，添加6~8mL完全培養(yǎng)基，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

三、細(xì)胞凍存

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。步驟如下：

1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL。

2. 1000rpm離心3-5分鐘，去掉上清，用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL分配到一個凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)：

所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。