Tu212人喉癌細(xì)胞

產(chǎn)品編號：CL-096h

細(xì)胞特性

形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，多角形，不規(guī)則形

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)條件：氣相：95%AIR，5%CO₂；溫度：37℃；培養(yǎng)箱濕度：70%-80%

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運(yùn)輸）/2mL凍存管x2（干冰運(yùn)輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實(shí)驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

完全培養(yǎng)基配制

該細(xì)胞完全培養(yǎng)基為：

90%IMDM + 10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清

收貨須知

收貨當(dāng)天發(fā)現(xiàn)異常，請在 24 小時內(nèi)及時聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好！

凍存管形式：收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若長時間不使用，應(yīng)過夜轉(zhuǎn)移至液氮。

T25 形式：收貨后于培養(yǎng)箱靜置2-3h，再對細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)操作。請嚴(yán)格按照本說明操作，否則造成細(xì)胞失活等情形，不予提供補(bǔ)發(fā)服務(wù)。

細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存操作

（一）細(xì)胞復(fù)蘇

① 凍存管從液氮或-80℃中取出放入 PE 手套中，迅速沒入 37℃水浴鍋，搖晃凍存管加速溶解，以 1 min內(nèi)全部溶解為宜；

② 在超凈臺中將溶解好的細(xì)胞液加入到裝有 9mL 完全培養(yǎng)基的離心管內(nèi)，1000-1200rpm/min離 心 5 分鐘，棄去上清液，用 1-2mL 完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；

③ 將細(xì)胞懸液加入到含有 5-6mL 完全培養(yǎng)基的 T25 瓶中，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

（二）細(xì)胞傳代

① 將舊培養(yǎng)液吸除，PBS 清洗兩遍后，加入1-2mL 胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA）；

② 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動時（可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打細(xì)胞層某處， 肉眼可見細(xì)胞層脫落，即消化完成，否則繼續(xù)消化），直接吸掉胰酶，加入 5-6 mL完全培養(yǎng)基，輕 輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散；

③ 將細(xì)胞懸液按1:2 比例分到新的 T25 瓶中，添加適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，置于培養(yǎng) 箱中培養(yǎng)；

④ 注意培養(yǎng)基 pH 值變化和細(xì)胞密度，定期換液（每周 2-3 次），待細(xì)胞密度達(dá)到 80%-90%時， 重復(fù)傳代操作或者凍存。

注意事項：

① 細(xì)胞具有密度依賴性，首次傳代（密度達(dá)到 80%），建議 1:2 傳代（保持細(xì)胞密度），且優(yōu)先在 T25瓶中。

② 密封培養(yǎng)瓶的話，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松。

（三）細(xì)胞凍存

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗使用。以T25瓶為例：

① 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL；

② 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用細(xì)胞凍存液（50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO）重懸細(xì)胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL分配到一個凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息；

③ 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。