規(guī)格：100mL

儲(chǔ)存條件：基礎(chǔ)液2-8℃保存；添加劑-20℃保存，混勻后2-8℃保存，2周內(nèi)使用完畢。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

人多能干細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)基是針對(duì)復(fù)蘇存活率較低的人多能干細(xì)胞研發(fā)的產(chǎn)品，其含有促進(jìn)細(xì)胞貼壁存活的因子，可大大提高h(yuǎn)ESC/hiPSC復(fù)蘇的效率。

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑準(zhǔn)備：

人多能干細(xì)胞復(fù)蘇添加劑復(fù)溶和分裝：首先要開啟添加劑小瓶上的鋁蓋，并使用酒精棉球擦拭其表面，在生物安全柜中使用一次性無(wú)菌5mL注射器吸取取適量的人多能干細(xì)胞復(fù)蘇基礎(chǔ)培養(yǎng)基(推薦5mL)加入到人多能干細(xì)胞復(fù)蘇添加劑瓶中，顛倒混勻添加劑小瓶使其充分溶解，可按實(shí)際用量對(duì)添加劑進(jìn)行分裝分裝后重新置于-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

注：如果要進(jìn)行添加劑分裝，為確保取液量精準(zhǔn)，可先用移液管量取5mＬ基礎(chǔ)液培養(yǎng)基置于15m離心管中，然后再用注射器吸取。

人多能干細(xì)胞復(fù)蘇完全培養(yǎng)基：將復(fù)溶的人多能干細(xì)胞復(fù)蘇添加劑加入復(fù)蘇基礎(chǔ)培養(yǎng)基中形成復(fù)蘇完全培養(yǎng)基(推薦5mL復(fù)溶添加劑，每1mL與20mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基混合)。

注：復(fù)蘇完全培養(yǎng)基可在2-8℃穩(wěn)定儲(chǔ)存2周。

細(xì)胞復(fù)蘇操作流程：

1. 將人多能干細(xì)胞復(fù)蘇完全培養(yǎng)基取出并平衡至室溫；取出包被過(guò)人多能干細(xì)胞鋪底工作液的培養(yǎng)皿/瓶，吸去包被液并加入適量人多能干細(xì)胞復(fù)蘇完全培養(yǎng)基，置于5%CO?的37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中。

2. 37℃水浴解凍細(xì)胞，小心搖晃使細(xì)胞融化至僅剩一小塊冰晶，迅速取出并用75%酒精消毒凍存管外表面，轉(zhuǎn)移至無(wú)菌操作臺(tái)中。

3. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至新的15m離心管中,緩慢加入4mL人多能干細(xì)胞完全培養(yǎng)基,輕柔吹吸2次混勻。

4. 200g離心5分鐘。

5. 棄上清，加入適量人多能干細(xì)胞復(fù)蘇完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，輕柔吹吸2次混勻，并接種到準(zhǔn)備好的培養(yǎng)皿中，顯微鏡下觀察細(xì)胞呈4～10個(gè)細(xì)胞大小的團(tuán)塊。

6. 水平十字搖勻，于室溫放置10～15分鐘。顯微鏡下觀察到大部分克隆貼在皿底后5%CO?的37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。

7. 棄掉人多能干細(xì)胞復(fù)蘇完全培養(yǎng)基,加入新鮮的完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),每天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。