NE-4C 小鼠神經(jīng)干細(xì)胞

產(chǎn)品編號：CL-190m

細(xì)胞特性

形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，短梭形，貼壁生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運(yùn)輸）/ 2mL凍存管x2（干冰運(yùn)輸）

用途：僅供科研使用

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

收貨須知

收貨當(dāng)天發(fā)現(xiàn)異常，請?jiān)?/span>24小時內(nèi)及時聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好！

凍存管形式：收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若長時間不使用，應(yīng)過夜轉(zhuǎn)移至液氮。

T25形式：收貨后于培養(yǎng)箱中靜置2-3h，再對細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)操作。請嚴(yán)格按照本說明操作，否則造成細(xì)胞失活等情形，不予提供補(bǔ)發(fā)服務(wù)。

細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存操作

（一）細(xì)胞復(fù)蘇

①　凍存管從液氮或-80℃中取出放入 PE 手套中，迅速沒入 37℃水浴鍋，搖晃凍存管加速溶解，以 1 min內(nèi)全部溶解為宜；

②　在超凈臺中將溶解好的細(xì)胞液加入到裝有 9mL 完全培養(yǎng)基的離心管內(nèi)，1000-1200rpm/min 離心 3-5 分鐘，棄去上清液，用 1-2mL 完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；

③　然后將細(xì)胞懸液加入到含有 5-6mL 完全培養(yǎng)基的 T25 瓶中，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

（二）細(xì)胞傳代

①　將舊培養(yǎng)液吸除，PBS 清洗兩遍后，加入 1-2mL 胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA）；

②　鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動時（可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，肉眼可見細(xì)胞層脫落，即消化完成，否則繼續(xù)消化），直接吸掉胰酶，加入 5-6 mL完全培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散；

③　將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的 T25 瓶中，添加適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

④　注意培養(yǎng)基 PH 值變化和細(xì)胞密度，定期換液（每周 2-3 次），待細(xì)胞密度達(dá)到 80%-90%時，重復(fù)第 1 項(xiàng)操作或者凍存。

    注意事項(xiàng)：

    ① 細(xì)胞具有密度依賴性，首次傳代（密度達(dá)到 80%），建議 1:2 傳代（保持細(xì)胞密度），且優(yōu)先在 T25 瓶中。

    ② 密封培養(yǎng)瓶的話，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松。

    ③ 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代前需提前至少 2 個小時在培養(yǎng)皿（培養(yǎng)瓶）中鋪 15μg/mL 的 poly-L-lysine。按照產(chǎn)品說明書，可用無菌水或 PBS 配置 poly-L-lysine 至終濃度 15μg/ml。

    ④消化細(xì)胞時，使用 0.05% (w/v) Trypsin-0.53 mM EDTA 溶液。