

其它名稱: RM-1/Luc
產(chǎn)品編號: CL-185m
價(jià)格: ¥3000
RM-1/Luc小鼠前列腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記
產(chǎn)品編號:CL-185m
一、細(xì)胞介紹
17日齡C57BL/6胚胎泌尿生殖竇細(xì)胞感染Zipras/myc9逆轉(zhuǎn)錄病毒,移植于同基因成年雄性小鼠腎包膜下。該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。
注意:每傳10代左右用嘌呤霉素(4ug/mL)鞏固一下。
二、細(xì)胞特性
來源:小鼠
形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長
含量:>1x10?cells
規(guī)格:T25瓶x1(常溫運(yùn)輸)/ 含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管x2(干冰運(yùn)輸)
用途:本產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用,不可用于動(dòng)物或人類治療或診斷用途
三、完全培養(yǎng)基及凍存液配制
1) 該細(xì)胞完全培養(yǎng)基為:RPMI-1640培養(yǎng)基+10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清+1%雙抗
2) 培養(yǎng)環(huán)境:37℃;95% Air,5% CO?;濕度為70%-80%
3) 凍存液:90%血清+10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配
四、收貨注意事項(xiàng)
1) 凍存細(xì)胞:收貨后檢查干冰融化、凍存管是否破損及瓶蓋脫落情況。如無異常情況,1支凍存管按照說明書要求盡快復(fù)蘇,另一支轉(zhuǎn)入液氮儲(chǔ)存。如果第一支復(fù)蘇效果不理想,需及時(shí)聯(lián)系反饋,在我方技術(shù)指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支凍存細(xì)胞。
2) 復(fù)蘇細(xì)胞:收到細(xì)胞后,用75%酒精擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部,不拆封口膜將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜置2-3h以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況、檢查有無微生物污染現(xiàn)象、拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細(xì)胞狀態(tài),前三天所拍照片將作為售后服務(wù)依據(jù)。
3) 對于貼壁生長的細(xì)胞:①靜置后顯微鏡下觀察細(xì)胞生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在運(yùn)輸過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。②若細(xì)胞匯合度未超過80%,可去除培養(yǎng)瓶中舊液(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新的完全培養(yǎng)基5mL,放入37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)(若培養(yǎng)瓶為密封瓶蓋須擰松瓶蓋)。③若細(xì)胞匯合度超過80%,請立即傳代(若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收),首次傳代,建議 1:2 傳代(兩個(gè)T25)。
細(xì)胞培養(yǎng)操作說明
一、細(xì)胞復(fù)蘇
1. 將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管快速放入37℃水浴中解凍,輕輕搖晃加速溶解,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%酒精擦拭凍存管外壁。
2. 將凍存管內(nèi)容物加入到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,1000rpm離心5min。
3. 棄去上清液,補(bǔ)加 4-6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻,接種于T25培養(yǎng)瓶中,放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。
4. 第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
注意:在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和佩戴防護(hù)面罩,避免凍存管爆炸造成人員傷害。
二、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化2-3min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后,加 5mL 以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3. 輕輕吹打細(xì)胞,完全脫落后吸出至離心管中,1000rpm 離心 5-8min,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 完全培養(yǎng)基后吹勻。
4. 按5-6mL/瓶補(bǔ)加完全培養(yǎng)基,將細(xì)胞懸液按 1:2 ~ 1:3 的比例分到新的含 5-6 mL 完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中或者培養(yǎng)瓶中,放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
三、細(xì)胞凍存
收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。步驟如下:
1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/mL。
2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清,用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞,按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/mL分配到一個(gè)凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3. 將要凍存的細(xì)胞放入程序降溫盒中,-80℃冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項(xiàng):
所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全柜內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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