

其它名稱: GalK1; GalK 1; DR2R1610; DR2R 1610; R1610; R 1610
產(chǎn)品編號: CL-079e
價格: ¥3000
產(chǎn)品編號:CL-079e
細胞特性
含量:>1x106cells;
生長特性:貼壁生長;
細胞形態(tài):成纖維細胞,梭形,邊緣不規(guī)則,單層貼壁生長,背景干凈;
規(guī)格:T25瓶或者2mL凍存管包裝;
用途:僅供科研使用。
細胞運輸、保存及注意事項
復蘇細胞 | 凍存細胞 | |
包裝 | 充液的T25細胞培養(yǎng)瓶 | 2mL凍存管 |
運輸條件 | 常溫 | 干冰 |
保存方式 | 75%酒精消毒瓶壁,置于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱 | -80℃冰箱中保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮/立即復蘇 |
注意事項 | ①收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁,將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們; ②請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照,10X和20X各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù); ③貼壁細胞:細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在運輸過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收; ④運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。 |
培養(yǎng)條件
完全培養(yǎng)基 | DMEM-H完全培養(yǎng)基:90%DMEM-H+10%FBS |
培養(yǎng)條件 | 培養(yǎng)溫度37℃;氣體環(huán)境5%CO2+95%空氣; |
凍存液 | 50%基礎培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO |
細胞復蘇、傳代、凍存操作
一、細胞復蘇:
①凍存管從液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中,迅速沒入37℃水浴鍋,搖晃凍存管加速溶解,以1min內(nèi)全部溶解為宜;
②在超凈臺中將溶解好的細胞液加入到裝有9mL完全培養(yǎng)基的離心管內(nèi),1000-1200rpm離心5min,棄去上清液,用1-2mL完全培養(yǎng)基重懸細胞;
③將細胞懸液加入到含有5-6mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
二、細胞傳代:
①將舊培養(yǎng)液吸除,PBS清洗兩遍后,加入1-2mL胰酶(0.25%Trypsin+0.02%EDTA);
②鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打細胞層某處,肉眼可見細胞層脫落,即消化完成,否則繼續(xù)消化),直接吸掉胰酶,加入5-6mL完全培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散;
③將細胞懸液按1:2比例分到新的T25瓶中,添加適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
④注意培養(yǎng)基pH值變化和細胞密度,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%-90%時,重復傳代操作或者凍存。
三、細胞凍存:
收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例:
① 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.
② 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
③將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項:
①所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
②建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會泄漏,并會慢慢充滿液氮。解凍時,液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。
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