OK 負鼠腎細胞

產品編號：CL-077e

細胞特性

含量：>1x106cells；

生長特性：貼壁生長；

細胞形態(tài)：上皮細胞樣，多角形；

規(guī)格：T25瓶或者2mL凍存管包裝；

用途：僅供科研使用。

細胞運輸、保存及注意事項

 培養(yǎng)條件

細胞復蘇、傳代、凍存操作

一、細胞復蘇：

   ① 凍存管從液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中，迅速沒入37℃水浴鍋，搖晃凍存管加速溶解，以1min內全部溶解為宜；

   ②在超凈臺中將溶解好的細胞液加入到裝有9mL完全培養(yǎng)基的離心管內，1000-1200rpm離心5min，棄去上清液，用1-2mL完全培養(yǎng)基重懸細胞；

   ③將細胞懸液加入到含有5-6mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

二、細胞傳代：

   ①將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入1-2mL胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA）；

   ②鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打細胞層某處，肉眼可見細胞層脫落，即消化完成，否則繼續(xù)消化），直接吸掉胰酶，加入5-6mL完全培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散；

  ③將細胞懸液按1:2比例分到新的T25瓶中，添加適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

   ④注意培養(yǎng)基pH值變化和細胞密度，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%-90%時，重復傳代操作或者凍存。

三、細胞凍存:

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：

  ① 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

  ② 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

  ③將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

  ①所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

  ②建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。