DU4475人乳腺上皮細胞（三陰性）

產品編號：CL-617h

一、細胞介紹

從一名62歲女性的未分化癌的局部轉移性皮膚結節(jié)建立，該癌在低分化乳腺導管癌的根治性乳房切除術后7年發(fā)展；文獻中描述的細胞很容易在無胸腺裸鼠體內生長并產生腫瘤，從中可以將細胞引入體外培養(yǎng)；據報道，細胞表達乳脂肪球的成分，并且呈三陰性。

二、細胞特性

來源：白人女性胸部，乳腺

形態(tài)：上皮細胞樣，懸浮生長，多細胞聚集

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/ 含有1mL細胞懸液的凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

三、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 該細胞完全培養(yǎng)基為：RPMI-1640 + 10%優(yōu)質胎牛血清 + 1%雙抗

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃；95% Air，5% CO?；培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

3) 凍存液：90%血清+10%DMSO，現用現配

四、收貨注意事項

1) 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細胞有污染，凍存細胞若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落，請拍照后及時與我們聯系。

2) 75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于培養(yǎng)箱靜置約2-3h，在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據。

3) 對于懸浮生長的細胞：若細胞密度超過80%，則可以根據以下提供的細胞培養(yǎng)步驟進行傳代或凍存；若細胞密度未達到80%，可收集細胞懸液離心，去除上清，加入 6mL 完全培養(yǎng)基，放入細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)操作步驟

一、細胞復蘇

1. 將含有1mL細胞懸液的凍存管快速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃加速溶解，直至凍存管中無結晶，然后用75%酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內容物加入到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，補加 4-6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻，接種于T25培養(yǎng)瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。

4. 第二天換液并檢查細胞密度。

注意：在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和佩戴防護面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細胞傳代：細胞密度達80%-90%，即可進行傳代

方法一（離心法）：將細胞懸液收集到離心管中，1000rpm離心5-8min，棄去上清，加入1-2mL完全培養(yǎng)基重懸，按1:2到1:3的比例分配到新的含 5-6 mL 完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿中。

方法二（半量換液法）：將T25瓶豎起來，在培養(yǎng)箱靜置10-20分鐘，肉眼可見大部分細胞沉在底部，輕輕吸去半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起混勻，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分配到新的含 5-6 mL 完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿或培養(yǎng)瓶中。一般半量換液3次離心傳代一次。

三、細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。步驟如下：

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/mL。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清，用細胞凍存液重懸細胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞放入程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。