Nb2-11 大鼠淋巴瘤細(xì)胞

產(chǎn)品編號(hào)：CL-054r

一、細(xì)胞特性

形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣，圓形，單個(gè)細(xì)胞，多數(shù)聚團(tuán)，懸浮生長(zhǎng)

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運(yùn)輸）/ 含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管x2（干冰運(yùn)輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用，不可用于動(dòng)物或人類(lèi)治療或診斷用途

二、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 該細(xì)胞完全培養(yǎng)基為：89%DMEM-H＋10%FBS＋1%NEAA

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃，95% Air，5% CO?

3) 凍存液：推薦使用非程序無(wú)血清細(xì)胞凍存液（貨號(hào)：RC-0102）

三、收貨注意事項(xiàng)

1) 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細(xì)胞有污染，凍存細(xì)胞若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落，請(qǐng)拍照后及時(shí)與我們聯(lián)系。

2) 75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2—3h，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2—3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3) 對(duì)于貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞：在無(wú)菌條件下，將培養(yǎng)瓶的全部?jī)?nèi)容物轉(zhuǎn)移到離心管中，在125 x g轉(zhuǎn)速下離心 5-10 min 后重懸細(xì)胞，轉(zhuǎn)移懸浮細(xì)胞到新的 T25 瓶中，補(bǔ)加完全培養(yǎng)基到 10mL，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1. 將細(xì)胞凍存管快速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃加速溶解，直至凍存管中無(wú)結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內(nèi)容物加入含有9mL完全培養(yǎng)基的離心管中，1000-1200rpm離心5min。

3. 棄去上清液，用1—2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，加入含有6—7mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（培養(yǎng)瓶建議豎著培養(yǎng)）。

4. 第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意：在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和佩戴防護(hù)面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細(xì)胞傳代

① 離心法：收集細(xì)胞，1000rpm條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1—2mL培養(yǎng)液后吹勻，將 細(xì)胞懸液按1:2 的比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的T25瓶中。

② 半量換液法：可選用半換液方式，將T25瓶子豎起來(lái)，輕輕拍打兩下，在培養(yǎng)箱靜置10分鐘，肉眼可見(jiàn)大部分細(xì)胞沉在底部，輕輕吸去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的T25瓶中。

③ 注意培養(yǎng)基 pH 值變化和細(xì)胞密度，定期換液（每周 2-3 次），待細(xì)胞密度達(dá)到大于2×10?個(gè)/mL 時(shí)，重復(fù)傳代操作或者凍存。

三、細(xì)胞凍存

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。步驟如下：

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/mL。

2. 1000rpm離心3—5min，去掉上清，用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/mL分配到一個(gè)凍存管中，標(biāo)注好名稱(chēng)、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞放入-80℃冰箱中，24h后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)：

所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全柜內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。