

其它名稱: RM
產(chǎn)品編號: CL-052r
價格: ¥3000
產(chǎn)品編號:CL-052r
一、細胞特性
形態(tài):上皮細胞樣,短梭形,多角形,邊緣不規(guī)則
生長特性:貼壁生長
含量:>1x10?cells
規(guī)格:T25瓶x1(常溫運輸)/ 含有1mL細胞懸液的凍存管x2(干冰運輸)
用途:本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用,不可用于動物或人類治療或診斷用途
二、完全培養(yǎng)基及凍存液配制
1) 該細胞完全培養(yǎng)基為:90%DMEM+10%FBS
2) 培養(yǎng)環(huán)境:37℃,95% Air,5% CO?;培養(yǎng)箱濕度為70%-80%
3) 凍存液:推薦使用非程序無血清細胞凍存液(貨號:RC-0102)
三、收貨注意事項
1) 收到細胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細胞有污染,凍存細胞若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,請拍照后及時與我們聯(lián)系。
2) 75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱靜置約2-3h,在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時,最好在低倍鏡(4x或5x物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B(tài)請在10×和20×物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3) 對于貼壁生長的細胞:①靜置后顯微鏡下觀察細胞生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在運輸過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。②若細胞密度未超過80%,可去除培養(yǎng)瓶中舊液(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新的完全培養(yǎng)基5mL,放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)(若培養(yǎng)瓶為密封瓶蓋須擰松瓶蓋)。③若細胞密度超過80%,請立即傳代(若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收),首次傳代,建議 1:2 傳代(兩個T25)。
細胞培養(yǎng)操作說明
一、細胞復蘇
1. 將細胞凍存管快速放入37℃水浴中解凍,輕輕搖晃加速溶解,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。
2. 將凍存管內(nèi)容物加入到含有9mL完全培養(yǎng)基的離心管中,1000-1200rpm離心5min。
3. 棄去上清液,用1-2mL完全培養(yǎng)基重懸細胞,接種到含有5-6mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中,放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注意:在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和佩戴防護面罩,避免凍存管爆炸造成人員傷害。
二、細胞傳代:細胞密度達80%-90%,即可進行傳代
1. 將舊培養(yǎng)液吸除,PBS 清洗兩遍后,加入 1-2mL 胰酶(0.25%Trypsin+0.02%EDTA);
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打細胞層某處,肉眼可見細胞層脫落,即消化完成,否則繼續(xù)消化),直接吸掉胰酶,加入5-6mL完全培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落、吹散;
3. 將細胞懸液按1:2比例分到新的T25瓶中,添加適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基,把細胞懸液打勻,放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 pH 值變化和細胞密度,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%-90%時,重復傳代操作或者凍存。
注意事項:細胞具有密度依賴性,首次傳代(密度達到 80%),建議1:2 傳代(保持細胞密度),且優(yōu)先在 T25 瓶中。密封培養(yǎng)瓶的話,處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松。
三、細胞凍存
收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。步驟如下:
1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/mL。
2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清,用細胞凍存液重懸細胞,按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/mL分配到一個凍存管中,標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3. 將要凍存的細胞放入-80℃冰箱中,24h后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項:
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全柜內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
地址:湖北省武漢市東湖高新技術開發(fā)區(qū)光谷三路778號
自貿(mào)生物創(chuàng)新港9層
郵箱:service@51cells.cn
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