MH-S小鼠肺泡巨噬細胞

產(chǎn)品編號：CL-096m

一、細胞簡介

MH-S細胞系是通過SV40轉(zhuǎn)化小鼠肺泡巨噬細胞的粘附細胞富集群體而衍生的。細胞保留了肺泡巨噬細胞的許多特性，包括典型的巨噬細胞形態(tài)。它們是粘附的，吞噬的，酯酶陽性的和過氧化物酶陰性的。脂多糖（LPS）處理可刺激IL-1的產(chǎn)生。所述細胞能夠以細胞劑量依賴性方式抑制體外噬菌斑形成細胞（PFC）應答。

二、細胞描述

來源：7周齡小鼠，肺

形態(tài)：懸浮和貼壁細胞混合生長

培養(yǎng)條件：氣相：5%CO₂+95%AIR；溫度：37℃；培養(yǎng)箱濕度：70%-80%

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/2mL凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

三、完全培養(yǎng)基配制

該細胞完全培養(yǎng)基為：

RPMI-1640培養(yǎng)基 + 優(yōu)質(zhì)胎牛血清10% + 雙抗1% + 0.05mM β-巰基乙醇。

四、細胞接收注意事項

收貨當天發(fā)現(xiàn)異常，請在24小時內(nèi)及時聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好!

凍存管形式：收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若長時間不使用，應過夜轉(zhuǎn)移至液氮。

T25瓶形式：收貨后于培養(yǎng)箱中靜置2-3h，再對細胞進行常規(guī)操作。請嚴格按照本說明 操作，否則造成細胞失活等情形，不予提供補發(fā)服務(wù)。

對于半貼細胞或貼壁不牢（懸?。┘毎?/span>：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，需收集T25瓶中的懸浮細胞，離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)；若細胞密度在70%-90%，對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞，離心后回收。

注意：運輸用的灌液培養(yǎng)基不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書要求配制的新鮮完全培養(yǎng)基。收到細胞后第一次傳代建議使用T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

細胞復蘇、傳代、凍存操作

（一）凍存細胞復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

注意：建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩，避免凍存管因溫差變化發(fā)生爆炸造成人員傷害。

（二）細胞傳代

細胞密度達到70%~90%時，即可進行傳代培養(yǎng)，步驟如下：

① 收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢，PBS潤洗后細胞會脫落，所以PBS也要回收到離心管中。

② 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4mL含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

③ 將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞，1000rpm離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液，重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

（三）細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

① 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/mL。

② 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用細胞凍存液重懸細胞（推薦使用無血清細胞凍存液，貨號：RC-0102），按每1mL凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

③ 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

        所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。