

其它名稱: Human Breast Cancer Adriamycin Resistant Cell Line; MCF-7/adr; MCF7/adr
產(chǎn)品編號: CL-147h
價格: ¥2500
人乳腺癌阿霉素耐藥細胞(MCF-7/ADR)
產(chǎn)品編號:CL-147h
細胞介紹
MCF-7/Adr為由MCF-7細胞構建的耐Adr藥物細胞株。
細胞特性
1) 來源:人乳腺癌細胞耐藥篩選
2) 形態(tài):上皮細胞樣,貼壁生長
3) 含量:>1x10?cells
4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用。
細胞運輸、保存及注意事項
復蘇細胞 | 凍存細胞 | |
包裝 | 1mL凍存管 | |
運輸條件 | 常溫 | 干冰 |
保存方式 | 37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱 | -80℃冰箱中保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或立即復蘇 |
※注意事項 | 1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細胞有污染;或凍存管有破損,融化、漏液等,請立即拍照并聯(lián)系我們。照片包括細胞培養(yǎng)瓶/凍存管外觀,顯微鏡下細胞照片(100倍,200倍各2張); 2. 若收到的復蘇細胞有少量細胞脫落、飄起,可能由于運輸途中導致。請先于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中靜置2~3h后,再進行處理; 3. 復蘇細胞的充液培養(yǎng)基為不含藥物的維持培養(yǎng)基,血清濃度較低,收到細胞后請及時更換為完全培養(yǎng)基; 4. 建議收到細胞后,首先進行擴增(至少3代),并凍存部分細胞以備用。 5. 初次培養(yǎng),當細胞匯合度達約80%時,可加入400ng/mL ADR的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細胞完全融合后傳代。細胞傳代1~2次后仍能保持增殖,即可提高藥物濃度至500ng/mL繼續(xù)培養(yǎng);若此過程中細胞停止增殖,且狀態(tài)較差,則需降低藥物濃度(首次降低一半藥物濃度)或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng),至細胞匯合度達80%左右,且生長狀態(tài)較好時,再更換為所需的ADR藥物濃度。 6. 細胞凍存過程中,不可添加藥物。 |
細胞培養(yǎng)試劑的配制
1)ADR藥物的配制及保存
建議將ADR藥物配制成1mg/mL的母液,即使用10mL PBS溶液溶解10mg ADR藥物,使其完全溶解后,使用0.22um濾器過濾除菌。
注意:可根據(jù)用量配置藥物,并將藥物分裝保存,避免反復凍融導致藥物失效。溶解后的Taxol,4℃保存1周,-20℃保存1個月,-80℃保存6個月。
2)凍存液的配制
90%優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。(凍存液中不含藥物)
3)完全培養(yǎng)基的配制
成分 | 體積/濃度 |
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 | 10% |
雙抗 | 1% |
500ng/mL ADR | 0.05%母液(1mg/mL) |
RPMI-1640培養(yǎng)基 | 補充至所需體積 |
細胞培養(yǎng)條件
氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%~80%。
細胞處理
1)凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4~6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,1000rpm/min離心3~5min,棄去上清液。加入1mL完全培養(yǎng)基重懸細胞后,均勻鋪于含6~8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中,置于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
注意:①細胞復蘇過程中,不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。須在細胞生長至匯合度達80%左右時,方可添加400ng/mL ADR藥物;若細胞生長狀態(tài)較為緩慢,可適當降低ADR的濃度(首次降低一半藥物濃度),或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細胞生長狀態(tài)較好時,再更換為所需的ADR濃度。
②建議復蘇細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩,避免凍存管處于溫差較大情況下發(fā)生爆炸,造成人員傷害。
2)細胞傳代(建議以同等底面積的培養(yǎng)瓶/皿按照1:2比例傳代)
①待細胞密度達到80%~90%時,即可進行傳代培養(yǎng)。
②棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1次,吸凈殘余的PBS。
③加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化2~5min,顯微鏡下觀察細胞細胞大部分變圓并脫落,即可輕拍培養(yǎng)瓶至細胞全部脫落。迅速拿回操作臺,加入2倍體積的、含10%FBS的培養(yǎng)基中止消化。
④將細胞懸液移入離心管中,1000rpm/min離心5min,棄去上清液。
⑤向細胞沉淀中加入1~2mL完全培養(yǎng)基重懸細胞,輕吹混勻。將細胞懸液按1:1的比例均勻鋪于2個新的培養(yǎng)瓶/皿中,添加6~8mL完全培養(yǎng)基。
注意:細胞傳代1~2次后仍能保持增殖,即可提高藥物濃度至500ng/mL繼續(xù)培養(yǎng);若此過程中細胞停止增殖,且狀態(tài)較差,則需降低藥物濃度(首次降低一半藥物濃度)或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng),至細胞匯合度約80%,且生長狀態(tài)較好時,再更換為所需的ADR藥物濃度。
3)細胞凍存
①細胞凍存時,步驟同2)細胞傳代的①~④,細胞計數(shù)后,加入配制好的細胞凍存液,重懸細胞,按照1×106 ~ 1×107個細胞/mL分配到一個凍存管中,標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
注意:細胞凍存過程中,不可添加藥物。
②將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80℃冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
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