N1E-115小鼠神經(jīng)母細胞瘤細胞

產(chǎn)品編號：CL-208m

一、細胞特性

來源：小鼠

形態(tài)：上皮細胞樣，短梭形，圓形，半貼壁生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/2mL凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

二、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 該細胞完全培養(yǎng)基為：RPMI-1640培養(yǎng)基 + 10%FBS + 1%雙抗

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃，95% Air，5% CO?

3) 凍存液：90%血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配

三、收貨注意事項

1) 凍存細胞：收貨后檢查干冰融化、凍存管是否破損及瓶蓋脫落情況。如無異常情況，1支凍存管按照說明書要求盡快復蘇，另一支轉(zhuǎn)入液氮儲存。如果第一支復蘇效果不理想，需及時聯(lián)系反饋，在我方技術(shù)指導下復蘇第二支凍存細胞。

2) 復蘇細胞：收到細胞后，用75%酒精擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部，不拆封口膜將培養(yǎng)瓶放入37℃，5%CO?細胞培養(yǎng)箱中靜置2-3h以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后在顯微鏡下觀察細胞生長情況、檢查有無微生物污染現(xiàn)象、拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細胞狀態(tài)，前三天所拍照片將作為售后服務(wù)依據(jù)。

3) 對于半貼細胞和貼壁不牢（懸?。?/span>細胞：①靜置后懸浮細胞用離心管收集細胞懸液，1000rpm離心5min。②若細胞匯合度未超過80%，將離心收集到的懸浮細胞沉淀加入5mL完全培養(yǎng)基重懸，加入原培養(yǎng)瓶中，放入37℃，5%CO?細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若培養(yǎng)瓶為密封瓶蓋須擰松瓶蓋。③若細胞匯合度超過80%，將貼壁細胞根據(jù)貼壁細胞傳代方法消化、離心、收集；將懸浮細胞和貼壁細胞的沉淀用1-2mL完全培養(yǎng)基重懸收集到一起，混勻后，按1:2 進行分瓶傳代（2個T25）。

細胞培養(yǎng)操作步驟

一、細胞復蘇

1. 將細胞凍存管快速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃加速溶解，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內(nèi)容物加入到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，用5mL完全培養(yǎng)基重懸細胞沉淀，接種到T25培養(yǎng)瓶，放入37℃，5%CO?細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意：在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和佩戴防護面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細胞傳代

1. 細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，收集T25培養(yǎng)瓶中的懸浮細胞培養(yǎng)液，1000rpm離心5min。

2. 貼壁細胞用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1次，加入0.25% (w/v) 胰蛋白酶- 0.53 mM EDTA 約1mL至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5mL完全培養(yǎng)基終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15mL離心管中，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，將懸浮細胞和貼壁細胞的沉淀用1-2mL完全培養(yǎng)基重懸收集到一起，混勻后，按1：2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的完全培養(yǎng)基至5-8mL/瓶，放入37℃，5%CO?細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

三、細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。步驟如下：

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/mL。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清，用細胞凍存液重懸細胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞放入程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。