規(guī)格：100mL

儲存條件：基礎液2-8℃保存；添加劑-20℃保存，混勻后2-8℃保存，2周內使用完畢。

產品簡介：

人多能干細胞復蘇培養(yǎng)基是針對復蘇存活率較低的人多能干細胞研發(fā)的產品，其含有促進細胞貼壁存活的因子，可大大提高hESC/hiPSC復蘇的效率。

產品內容：

試劑準備：

人多能干細胞復蘇添加劑復溶和分裝：首先要開啟添加劑小瓶上的鋁蓋，并使用酒精棉球擦拭其表面，在生物安全柜中使用一次性無菌5mL注射器吸取取適量的人多能干細胞復蘇基礎培養(yǎng)基(推薦5mL)加入到人多能干細胞復蘇添加劑瓶中，顛倒混勻添加劑小瓶使其充分溶解，可按實際用量對添加劑進行分裝分裝后重新置于-20℃保存，避免反復凍融。

注：如果要進行添加劑分裝，為確保取液量精準，可先用移液管量取5mＬ基礎液培養(yǎng)基置于15m離心管中，然后再用注射器吸取。

人多能干細胞復蘇完全培養(yǎng)基：將復溶的人多能干細胞復蘇添加劑加入復蘇基礎培養(yǎng)基中形成復蘇完全培養(yǎng)基(推薦5mL復溶添加劑，每1mL與20mL基礎培養(yǎng)基混合)。

注：復蘇完全培養(yǎng)基可在2-8℃穩(wěn)定儲存2周。

細胞復蘇操作流程：

1. 將人多能干細胞復蘇完全培養(yǎng)基取出并平衡至室溫；取出包被過人多能干細胞鋪底工作液的培養(yǎng)皿/瓶，吸去包被液并加入適量人多能干細胞復蘇完全培養(yǎng)基，置于5%CO?的37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中。

2. 37℃水浴解凍細胞，小心搖晃使細胞融化至僅剩一小塊冰晶，迅速取出并用75%酒精消毒凍存管外表面，轉移至無菌操作臺中。

3. 將細胞懸液轉移至新的15m離心管中,緩慢加入4mL人多能干細胞完全培養(yǎng)基,輕柔吹吸2次混勻。

4. 200g離心5分鐘。

5. 棄上清，加入適量人多能干細胞復蘇完全培養(yǎng)基重懸細胞，輕柔吹吸2次混勻，并接種到準備好的培養(yǎng)皿中，顯微鏡下觀察細胞呈4～10個細胞大小的團塊。

6. 水平十字搖勻，于室溫放置10～15分鐘。顯微鏡下觀察到大部分克隆貼在皿底后5%CO?的37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。

7. 棄掉人多能干細胞復蘇完全培養(yǎng)基,加入新鮮的完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),每天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。