C2C12小鼠成肌細胞

產(chǎn)品編號：CL-019m

一、細胞介紹

這株細胞是D. Yaffe和O. Saxel建立的小鼠成肌細胞株的亞克隆(由H. Blau等人構(gòu)建)。C2C12細胞株可在低血清饑餓下分化，形成可伸縮的肌管并表達特征性的肌蛋白。如用骨形成蛋白2(BMP-2)處理后，分化途徑從成肌細胞轉(zhuǎn)換成成骨細胞。檢測表明鼠痘病毒（ectromelia virus，ECTV）陰性。

二、細胞特性

來源：C3H小鼠骨肉組織

形態(tài)：成纖維細胞樣，梭形；貼壁生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/ 含有1mL細胞懸液的凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

三、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 該細胞完全培養(yǎng)基為：89%DMEM + 10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清 + 1%雙抗

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃，95% Air，5% CO?

3) 凍存液：90%血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配；或使用本公司即用型無血清細胞凍存液

四、收貨注意事項

1) 凍存細胞：收貨后檢查干冰融化、凍存管是否破損及瓶蓋脫落情況。如無異常情況，1支凍存管按照說明書要求盡快復蘇，另一支轉(zhuǎn)入液氮儲存。如果第一支復蘇效果不理想，需及時聯(lián)系反饋，在我方技術(shù)指導下復蘇第二支凍存細胞。

2) 復蘇細胞：收到細胞后，用75%酒精擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部，不拆封口膜將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜置2-3h以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后在顯微鏡下觀察細胞生長情況、檢查有無微生物污染現(xiàn)象、拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細胞狀態(tài)，前三天所拍照片將作為售后服務依據(jù)。

3) 對于貼壁生長的細胞：①靜置后顯微鏡下觀察細胞生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在運輸過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。②若細胞匯合度未超過80%，可去除培養(yǎng)瓶中舊液（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中），加入新的完全培養(yǎng)基5mL，放入37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（若培養(yǎng)瓶為密封瓶蓋須擰松瓶蓋）。③若細胞匯合度超過80%，請立即傳代（若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收），首次傳代，建議 1:2 傳代（兩個T25）。

細胞培養(yǎng)操作步驟

一、細胞復蘇

1. 將含有1mL細胞懸液的凍存管快速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃加速溶解，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內(nèi)容物加入到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，補加 4-6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻，接種于T25培養(yǎng)瓶中，放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。

4. 第二天換液并檢查細胞密度。

注意：在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和佩戴防護面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細胞傳代：細胞密度達80%-90%，即可進行傳代

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化2-3min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后，加 5mL 以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出至離心管中，1000rpm 離心 5-8min，棄去上清液，補加 1-2mL 完全培養(yǎng)基后吹勻。

4. 按5-6mL/瓶補加完全培養(yǎng)基，將細胞懸液按 1:2 ~ 1:3 的比例分到新的含 5-6 mL 完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中或者培養(yǎng)瓶中，放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

三、細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。步驟如下：

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/mL。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清，用細胞凍存液重懸細胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞放入程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。