STC-1小鼠小腸內(nèi)分泌細(xì)胞

產(chǎn)品編號(hào)：CL-001m

細(xì)胞特性

含量：>1x10⁶cells；

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)；

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，不規(guī)則形，圓形；

規(guī)格：T25瓶或者2mL凍存管包裝；

用途：僅供科研使用。

細(xì)胞運(yùn)輸、保存及注意事項(xiàng)

培養(yǎng)條件

細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存操作

（一）細(xì)胞復(fù)蘇

①　凍存管從液氮或-80℃中取出放入 PE 手套中，迅速?zèng)]入 37℃水浴鍋，搖晃凍存管加速溶解，以 1 分鐘內(nèi)全部溶解為宜；

②　在超凈臺(tái)中將溶解好的細(xì)胞液加入到裝有 9ml 完全培養(yǎng)基的離心管內(nèi)，1000-1200rpm/min 離心 5 分鐘，棄去上清液，用 1-2mL 完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；

③　然后將細(xì)胞懸液加入到含有 5-6mL 完全培養(yǎng)基的 T25 瓶中，放入（37℃，5%CO₂）培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

注意：建議復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩，避免凍存管處于溫差較大情況下發(fā)生爆炸造成人員傷害。

（二）細(xì)胞傳代

①　將舊培養(yǎng)液吸除，PBS 清洗兩遍后，加入 1-2mL 胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA）；

②　鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，肉眼可見細(xì)胞層脫落，即消化完成，否則繼續(xù)消化），直接吸掉胰酶，加入 5-6 毫升完全培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。

③　將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的 T25 瓶中，添加適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

④　注意培養(yǎng)基 pH 值變化和細(xì)胞密度，定期換液（每周 2-3 次），待細(xì)胞密度達(dá)到 80%-90%時(shí)，重復(fù)傳代操作或者凍存。

注意事項(xiàng)：細(xì)胞具有密度依賴性，首次傳代（密度達(dá)到 80%），建議 1:2 傳代（保持細(xì)胞密度），且優(yōu)先在 T25 瓶中。密封培養(yǎng)瓶的話，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松。該細(xì)胞比較特殊，用 DMEM 培養(yǎng)產(chǎn)黑色素多點(diǎn)，用于藥物誘導(dǎo)試驗(yàn)明顯。

（三）細(xì)胞凍存:

凍存則用3mL凍存液（50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為3支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存。

注意事項(xiàng)

所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。