MGC-803人胃癌細(xì)胞

產(chǎn)品編號：CL-087h

一、細(xì)胞簡介

從一位53歲男性原發(fā)性胃低分化粘液樣腺癌患者建立。該株細(xì)胞DNA分型在細(xì)胞系檢索中找到完全匹配的細(xì)胞系，EXPASY數(shù)據(jù)庫顯示細(xì)胞名為MGC-803，細(xì)胞號對應(yīng)CVCL_5334。

Problematic cell line: Contaminated. Shown to be a HeLa derivative (PubMed=26116706).

二、細(xì)胞描述

來源：胃癌

形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長

培養(yǎng)條件：氣相：5%CO?+95%AIR；溫度：37℃；培養(yǎng)箱濕度：70%-80%

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運(yùn)輸）/2mL凍存管x2（干冰運(yùn)輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

三、完全培養(yǎng)基配制

該細(xì)胞完全培養(yǎng)基為：

RPMI-1640培養(yǎng)基 + 優(yōu)質(zhì)胎牛血清10% + 雙抗1%

四、細(xì)胞接收注意事項(xiàng)

收貨當(dāng)天發(fā)現(xiàn)異常，請?jiān)?/span>24小時內(nèi)及時聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好!

凍存管形式：收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若長時間不使用，應(yīng)過夜轉(zhuǎn)移至液氮。

T25瓶形式：收貨后于培養(yǎng)箱中靜置2-3h，再對細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)操作。請嚴(yán)格按照本說明操作，否則造成細(xì)胞失活等情形，不予提供補(bǔ)發(fā)服務(wù)。

對于貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中靜置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度在60%以下，去除培養(yǎng)瓶中舊培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中），加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)；若細(xì)胞生長密度達(dá)到70%-80%或以上，可對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

注意：運(yùn)輸用的灌液培養(yǎng)基不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書要求配制的新鮮完全培養(yǎng)基。收到細(xì)胞后第一次傳代建議使用T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存操作

（一）凍存細(xì)胞復(fù)蘇

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

注意：建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩，避免凍存管因溫差變化發(fā)生爆炸造成人員傷害。

（二）細(xì)胞傳代

細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%時，即可進(jìn)行傳代，步驟如下：

① 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

② 加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置 于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消 化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4mL含10%FBS的培 養(yǎng)基來終止消化。

③ 輕輕打勻后吸出，1000rpm離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1~2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸 液按1：2比例分到2個新的培養(yǎng)瓶中，添加6~8mL完全培養(yǎng)基，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。后續(xù)傳代 根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

（三）細(xì)胞凍存

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。步驟如下：

① 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì) 胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL。

② 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞（推薦使用無血清細(xì)胞凍存液，貨號： RC-0102），按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL分配到一個凍存管中，標(biāo)注好名稱、代 數(shù)、日期等信息。

③ 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍 存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)：

所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。