TCMK-1小鼠腎小管上皮細胞

產(chǎn)品編號：CL-128m

一、細胞簡介

該細胞是1963年從C3H小鼠腎小管組織分離培養(yǎng)的細胞，通過SV40 轉化的并且對 SV40 T 抗原呈陽性。約 2% 的細胞對 SV40 病毒抗原呈陽性，但病毒不可恢復。經(jīng)檢測，鼠痘病毒（鼠痘）呈陰性。 所有細胞顯示 2-6 個具有次級收縮的近端著絲粒染色體和每個細胞 1-4 個雙臂染色體。百分之六十的細胞有一條或多條微小的染色體。

二、細胞描述

來源：C3H小鼠，腎小管

形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

培養(yǎng)條件：氣相：5%CO₂+95%AIR；溫度：37℃；培養(yǎng)箱濕度：70%-80%

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/2mL凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

三、完全培養(yǎng)基配制

該細胞完全培養(yǎng)基為：

MEM培養(yǎng)基 + 優(yōu)質胎牛血清10% + 雙抗1%。

四、細胞接收注意事項

收貨當天發(fā)現(xiàn)異常，請在24小時內(nèi)及時聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好!

凍存管形式：收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若長時間不使用，應過夜轉移至液氮。

T25瓶形式：收貨后于培養(yǎng)箱中靜置2-3h，再對細胞進行常規(guī)操作。請嚴格按照本說明操作，否則造成細胞失活等情形，不予提供補發(fā)服務。

對于貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中靜置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度在60%以下，去除培養(yǎng)瓶中舊培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中），加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)；若細胞生長密度達到70%-80%或以上，可對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

注意：運輸用的灌液培養(yǎng)基不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書要求配制的新鮮完全培養(yǎng)基。收到細胞后第一次傳代建議使用T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

細胞復蘇、傳代、凍存操作

（一）凍存細胞復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

注意：建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩，避免凍存管因溫差變化發(fā)生爆炸造成人員傷害。

（二）細胞傳代

細胞密度達到80%-90%時，即可進行傳代，步驟如下：

① 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

② 加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置 于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消 化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4mL含10%FBS的培 養(yǎng)基來終止消化。

③ 輕輕打勻后吸出，1000rpm離心3-5min，棄去上清液，補加1~2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸 液按1：2比例分到2個新的培養(yǎng)瓶中，添加6~8mL完全培養(yǎng)基，置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。后續(xù)傳代 根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

（三）細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。步驟如下：

    ① 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細 胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/mL。

    ② 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用細胞凍存液重懸細胞（推薦使用無血清細胞凍存液，貨號： RC-0102），按每1mL凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代 數(shù)、日期等信息。

    ③ 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍 存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

    注意事項：

    所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。