A20小鼠B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

產(chǎn)品編號(hào)：CL-113m

細(xì)胞介紹

A20 [A-20]是一種BALB/c B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系，來(lái)源于在一只老年BALB/cAnN小鼠中發(fā)現(xiàn)的自發(fā)性網(wǎng)狀細(xì)胞腫瘤,當(dāng)細(xì)胞在 Click 培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)，表面免疫球蛋白表達(dá)很少；然而，當(dāng)它們?cè)?RPMI 1640 培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)，它們會(huì)表達(dá)大量。細(xì)胞可以呈遞同種異體抗原和蛋白質(zhì)抗原。檢測(cè)結(jié)果顯示，鼠痘病毒（鼠痘）呈陰性,該細(xì)胞系可用于免疫學(xué)研究。

細(xì)胞特性

來(lái)源：小鼠B淋巴細(xì)胞瘤

形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣，懸浮生長(zhǎng)

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25x1瓶（常溫運(yùn)輸）/ 2mL凍存管x2支（干冰運(yùn)輸）

用途：僅供科研使用

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

細(xì)胞接收注意事項(xiàng)

收貨當(dāng)天發(fā)現(xiàn)異常，請(qǐng)?jiān)?/span>24小時(shí)內(nèi)及時(shí)聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好!

凍存管形式：收貨后及時(shí)置于-80℃冰箱保存，若長(zhǎng)時(shí)間不使用，應(yīng)過(guò)夜轉(zhuǎn)移至液氮。復(fù)蘇時(shí)每管一次用完不得留存；

T25形式：①收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100x，200x各一張，觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況），以此做為收貨依據(jù)；②收到的是T25瓶發(fā)貨的細(xì)胞，抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。收到的是15mL離心管發(fā)貨的細(xì)胞，請(qǐng)將15mL離心管內(nèi)的細(xì)胞和上清液1：2分到2個(gè)新的T25培養(yǎng)瓶中加入1：1按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基即可。③運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存操作

（一）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

（二）細(xì)胞傳代

待細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)：

懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)的細(xì)胞，可以通過(guò)向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來(lái)維持細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，一般情況下細(xì)胞密度維持在1×10^5~1×10^6個(gè)/mL（不同細(xì)胞對(duì)密度要求不同）可以維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中，1000rpm 離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1：2~1：5的比例進(jìn)行。

（三）細(xì)胞凍存

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：

①　細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×10^7個(gè)活細(xì)胞/mL；

②　1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1mL凍存液含1×10^6~1×10^7個(gè)活細(xì)胞/mL分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱(chēng)、代數(shù)、日期等信息；

③　將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)：

①　所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

②　建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿(mǎn)液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。