HL1小鼠心肌細(xì)胞

產(chǎn)品編號(hào)：CL-220m

一、細(xì)胞簡(jiǎn)介

HL1心肌細(xì)胞系是1997年從Jackson實(shí)驗(yàn)室的一只成年雌性近交系C57BLy 6J小鼠中切除的皮下腫瘤中建立，該小鼠為轉(zhuǎn)染了由心房利鈉因子啟動(dòng)子和SV40區(qū)域組成的融合基因的轉(zhuǎn)基因小鼠。HL-1細(xì)胞是一種永生化的小鼠心肌細(xì)胞系，能夠持續(xù)分裂和自發(fā)收縮，同時(shí)保持已分化的心臟表型。HL-1細(xì)胞可以連續(xù)傳代且不會(huì)失去其分化的特異性心肌細(xì)胞表型，包括形態(tài)、生化和電生理特性等，常用于研究正常心肌細(xì)胞在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞代謝和轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面的功能，以及體外模擬諸如缺氧、高血糖-高胰島素血癥、細(xì)胞凋亡和缺血-再灌注等病理?xiàng)l件。

二、細(xì)胞特性

來源：雌，小鼠，心臟

形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

含量：1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運(yùn)輸）/2mL凍存管x2（干冰運(yùn)輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用，不可用于動(dòng)物或人類治療或診斷用途

注意：該細(xì)胞貼壁性差，請(qǐng)使用Corning的高吸附cellbinding細(xì)胞培養(yǎng)瓶（貨號(hào)：3289）進(jìn)行培養(yǎng)；或者使用明膠基質(zhì)（ThermoFisher貨號(hào)：A1413301）預(yù)包被培養(yǎng)瓶（1mL/T25培養(yǎng)瓶），37℃孵育1小時(shí)后去除基質(zhì)再進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。HL1細(xì)胞培養(yǎng)生長(zhǎng)至80% 即可傳代，細(xì)胞消化至少15分鐘后使細(xì)胞成纖維樣細(xì)胞收縮分離脫落即可用完全培養(yǎng)液沖散即可。

三、完全培養(yǎng)基配制

1) 該細(xì)胞完全培養(yǎng)基為：90%Claycomb Medium＋10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%＋0.1 mM Norepinephrine＋2 mM L-谷氨酰胺＋1%雙抗

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃；95% Air，5% CO?；濕度為70%～80%

3) 凍存液：推薦使用非程序無血清細(xì)胞凍存液（貨號(hào)：RC-0102）

四、細(xì)胞接收注意事項(xiàng)

1) 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細(xì)胞有污染，凍存細(xì)胞若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落，請(qǐng)拍照后及時(shí)與我們聯(lián)系。

2) 75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于培養(yǎng)箱靜置約2-3h。在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3) 對(duì)于貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞：①靜置后顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在運(yùn)輸過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。②若細(xì)胞匯合度未超過80%，可去除培養(yǎng)瓶中舊液（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重新打入原培養(yǎng)瓶中），加入新的完全培養(yǎng)基6-8mL，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（若培養(yǎng)瓶為密封瓶蓋須擰松瓶蓋）。③若細(xì)胞匯合度超過80%，可進(jìn)行傳代處理（若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收），首次傳代，建議 1:2 傳代（兩個(gè)T25）。

細(xì)胞培養(yǎng)操作說明

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1. 將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管快速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃加速溶解，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內(nèi)容物加入含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，用1-2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種到含有6-8mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

注意：在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和佩戴防護(hù)面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)80%～90%，即可進(jìn)行傳代

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后，加5mL以上含10%FBS的完全培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL新的完全培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

三、細(xì)胞凍存

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。步驟如下：

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/mL。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清，用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/mL分配到一個(gè)凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞放入-80℃冰箱中，24h后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)：

所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全柜內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。