人神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）說明書

產(chǎn)品編號：SC-DRY0105

產(chǎn)品規(guī)格：>1×10?cells

儲存條件：活細胞儲存于25℃～37℃，收到后請立即放入CO₂培養(yǎng)箱。

凍存細胞暫存于-80℃冰箱，2周有效期；液氮儲存，6個月有效期。

產(chǎn)品簡介

人神經(jīng)干細胞是一款即用型人神經(jīng)干細胞，該細胞是使用人神經(jīng)干細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)試劑盒將hESC/hiPSC細胞進行誘導(dǎo)分化獲得，其具備人神經(jīng)干細胞的典型特性，具有正常人類染色體核型，同時具有高純度和高擴增能力，且可以分化為神經(jīng)元細胞、少突膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞等。人神經(jīng)干細胞可以使用懸浮和貼壁兩種培養(yǎng)方式，本文介紹的是貼壁培養(yǎng)方法。

產(chǎn)品內(nèi)容

需要材料

l人神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種培養(yǎng)基

l人神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）維持培養(yǎng)基

l人神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）消化液

l細胞培養(yǎng)級無鈣鎂的PBS溶液

培養(yǎng)材料準備

l人神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種完全培養(yǎng)基：在室溫解凍神經(jīng)干細胞復(fù)蘇接種（貼壁培養(yǎng)）添加劑，吹打混勻，隨后將1mL添加劑加入100mL神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種基礎(chǔ)培養(yǎng)基形成完全培養(yǎng)基。神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種完全培養(yǎng)基可在2~8℃穩(wěn)定儲存4周。

l人神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）維持完全培養(yǎng)基：在室溫解凍神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）維持添加劑，吹打混勻，隨后將1mL添加劑加入100mL神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）維持基礎(chǔ)培養(yǎng)基形成完全培養(yǎng)基。神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）維持完全培養(yǎng)基可在2~8℃穩(wěn)定儲存4周。

        注意：神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種及維持添加劑室溫解凍，可按實際用量對添加劑進行分裝，分裝后重新置于-80~-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

細胞復(fù)蘇

1. 室溫平衡人貼壁神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種完全培養(yǎng)基。

2. 37℃水浴解凍細胞，小心搖晃使細胞融化至僅剩一小塊冰晶，迅速取出并用75%酒精消毒凍存管外表面，轉(zhuǎn)移至無菌操作臺中。

3. 將細胞懸液轉(zhuǎn)移至新的15mL離心管中，緩慢加入4mL人神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種完全培養(yǎng)基，輕柔吹吸2次混勻。

4. 1000rpm離心5分鐘。

5. 棄上清，加入適量人神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種完全培養(yǎng)基重懸細胞，輕柔吹吸2次混勻，并接種到準備好的培養(yǎng)皿中，顯微鏡下觀察細胞。

6. 37℃恒溫CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。

7. 棄上清，加入適量的人神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）維持培養(yǎng)基。

8. 放入37℃恒溫CO2細胞培養(yǎng)箱，2-3天換一次人神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）維持培養(yǎng)基。

9. 顯微鏡下觀察細胞匯合度達到100%即可傳代。

    貼壁人神經(jīng)干細胞傳代(6孔板1個孔細胞為例)：

注：建議長滿后按1：3傳代

1. 室溫平衡NeuroEasy人神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種完全培養(yǎng)基。

2. 吸去培養(yǎng)皿中上清液，加入無鈣鎂的PBS清洗培養(yǎng)皿。

3. 棄上清，使用無鈣鎂的PBS沖洗細胞，加入1mL/孔（6孔板）人神經(jīng)干細胞(貼壁培養(yǎng))消化液，37℃消化5~15min,待細胞變圓成單細胞，使用2mL人神經(jīng)干細胞(貼壁培養(yǎng))維持培養(yǎng)基終止消化，收集細胞于15mL離心管（消化細胞時需要將細胞徹底消化下來，切不可消化不充分而使用移液器暴力吹打）。

4. 1000rpm離心5分鐘。

5. 棄上清，在離心管中加入適量神經(jīng)干細胞(貼壁培養(yǎng))復(fù)蘇接種完全培養(yǎng)基，重懸細胞接種至合適的皿中，并使細胞均勻分布。

6. 37℃恒溫二氧化碳細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。

7. 次日顯微鏡下可觀察到細胞均勻貼壁在培養(yǎng)皿中。

8. 棄上清，更換成人神經(jīng)干細胞(貼壁培養(yǎng))維持培養(yǎng)基，一般維持培養(yǎng)基可以3天換液一次。

9. 顯微鏡下觀察細胞匯合度達到100%即可凍存/傳代。

細胞凍存

1. 室溫平衡人神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種完全培養(yǎng)基。

2. 吸去培養(yǎng)皿中上清液，加入無鈣鎂的PBS清洗培養(yǎng)皿。

3. 棄上清，使用無鈣鎂的PBS沖洗細胞，加入1mL/孔（6孔板）人神經(jīng)干細胞(貼壁培養(yǎng))消化液，37℃消化5~15min,待細胞變圓成單細胞，使用2mL人神經(jīng)干細胞(貼壁培養(yǎng))維持培養(yǎng)基終止消化，收集細胞于15mL離心管（消化細胞時需要將細胞徹底消化下來，切不可消化不充分而使用移液器暴力吹打）。取出培養(yǎng)皿，加入等體積神經(jīng)干細胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種完全培養(yǎng)基終止消化，用移液器將貼壁細胞吹打下來，收集于15mL離心管中。

4. 1000rpm離心5分鐘。

5. 棄上清，在離心管中加入無血清細胞凍存液，重懸細胞分裝至凍存管中。

6. 不使用程序化降溫盒，直接放入-80度冰箱凍存細胞即可。

7. 24小時以后可將細胞取出放入液氮中長期儲存。