Detroit 562 人咽頭癌胸水轉(zhuǎn)移細(xì)胞

產(chǎn)品編號：CL-629h

細(xì)胞特性

含量：>1x106cells

形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，多角形，邊緣不規(guī)則，單層貼壁生長

生長特性：貼壁生長

規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

用途：僅供科研使用

細(xì)胞運(yùn)輸、保存及注意事項(xiàng)

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存操作

一、細(xì)胞復(fù)蘇：

   ① 凍存管從液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中，迅速沒入37℃水浴鍋，搖晃凍存管加速溶解，以1min內(nèi)全部溶解為宜；

   ②在超凈臺中將溶解好的細(xì)胞液加入到裝有9mL完全培養(yǎng)基的離心管內(nèi)，1000-1200rpm離心5min，棄去上清液，用1-2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；

   ③將細(xì)胞懸液加入到含有6-8mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中，放入培養(yǎng)箱中豎立培養(yǎng)。

二、細(xì)胞傳代：

    ①離心法：收集細(xì)胞，1000rpm 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的 T25 瓶中。

    ②半量換液法：培養(yǎng)瓶靜置 5-10 分鐘后，將上清培養(yǎng)基輕輕吸走一半，剩余留有細(xì)胞沉淀的培養(yǎng)基重懸混勻，細(xì)胞懸液按 1：2 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的 T25 瓶中。

   ③注意培養(yǎng)基pH值變化和細(xì)胞密度，定期換液（每周 2-3 次），待細(xì)胞密度達(dá)到大于 于 2×10 6 個/ml 時，重復(fù)傳代操作或者凍存。

三、細(xì)胞凍存:

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：

  ① 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細(xì)胞/ml.

  ② 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

  ③將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)：

  ①所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

  ②建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。