CHO-K1中國倉鼠卵巢細(xì)胞（懸浮細(xì)胞）

產(chǎn)品編號：CL-035e

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞株是源自成年中國倉鼠卵巢深入活體組織切片的CHO細(xì)胞的亞克隆。

細(xì)胞特性

來源：中國倉鼠，雌，卵巢

形態(tài)：上皮細(xì)胞，懸浮生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運(yùn)輸）/ 2mL凍存管x2（干冰運(yùn)輸）

用途：僅供科研使用

細(xì)胞馴化前的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件：F12K培養(yǎng)基(SIGMA,貨號N3520，添加NaHCO3 2.5g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度。

細(xì)胞株馴化：復(fù)蘇CHO-K1細(xì)胞轉(zhuǎn)入T25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶，以F12K基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加10%血清培養(yǎng)，待細(xì)胞長滿單層后，加入 0.25 % 胰蛋白酶消化，傳代至裝有完全培養(yǎng)基的T25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶（Corning）中繼續(xù)培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞鋪滿瓶底時(shí)，即得貼壁 CHO-K1 細(xì)胞。取貼壁CHO-K1 細(xì)胞，換液，加入15 mL含血清的完全基和 15 mL無血清CHO-K1專用培養(yǎng)基，2天后吸出一半培養(yǎng)液，加入等量的無血清CHO-K1，每2天重復(fù)一次此操作，直到胎牛血清濃度低于 1 %后，以基礎(chǔ)培養(yǎng)基B001 繼續(xù)培養(yǎng)，即培養(yǎng)基中血清濃度依次以 5 %，2 .5 %，1.25%，0.625 %，0 %降低。細(xì)胞在無血清CHO-K1專用培養(yǎng)基中密度達(dá)到5 ×106cells/ mL時(shí)，即得懸浮 CHO-K1 細(xì)胞。培養(yǎng)條件：37℃，5 % CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

細(xì)胞接收注意事項(xiàng)

收貨當(dāng)天發(fā)現(xiàn)異常，請?jiān)?/span>24小時(shí)內(nèi)及時(shí)聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好!

凍存管形式：收貨后及時(shí)置于-80℃冰箱保存，若長時(shí)間不使用，應(yīng)過夜轉(zhuǎn)移至液氮。

T25形式：①收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-3h（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100x，200x各一張，觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況），以此做為收貨依據(jù)；②抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。③運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存操作

（一）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

（二）細(xì)胞傳代

待細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)：

第一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

（三）細(xì)胞凍存

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：

①　細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×10^7個(gè)活細(xì)胞/mL；

②　1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1mL凍存液含1×10^6~1×10^7個(gè)活細(xì)胞/mL分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息；

③　將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

    注意事項(xiàng)：

    ①　所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

    ②　建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。