4T1-OVA 小鼠乳腺癌細胞轉染表達OVA

產品編號：CL-218m

一、細胞介紹

4T1 是從410.4瘤株中未經誘變篩得的6-硫鳥嘌噙抗性細胞株。當注射到BALB/c 小鼠中時，4T1自發(fā)產生高轉移腫瘤，可轉移到肺，肝，淋巴結和大腦，同時在注射部位形成始發(fā)灶。誘導轉移時不需要摘除始發(fā)灶。4T1細胞在BALB/c小鼠中的生長與轉移特性與人體中的乳腺癌十分相近。這種腫瘤是人VI期乳腺癌的動物模型。4T1-誘導的腫瘤在手術后及未手術情況下轉移的動力學相近，可以用作手術后及未手術模型。 跟其他腫瘤模型相比，由于4T1的抗6-硫鳥嘌噙特性，微小的轉移細胞團(少到僅僅1個)也可以在許多遠端器官中檢測到。該細胞轉染表達OVA。

二、細胞特性

來源：小鼠乳腺癌

形態(tài)：上皮樣，貼壁生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/ 含有1mL細胞懸液的凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

注意：每傳10代左右用嘌呤霉素（4ug/mL）鞏固一下。

三、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 該細胞完全培養(yǎng)基為：RPMI-1640培養(yǎng)基＋10%優(yōu)質胎牛血清＋1%雙抗

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃；95% Air，5% CO?

3) 凍存液：推薦使用非程序無血清細胞凍存液（貨號：RC-0102）

四、收貨注意事項

1) 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細胞有污染，凍存細胞若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落，請拍照后及時與我們聯系。

2) 75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱靜置約2—4h，在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10×和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2—3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據。

3) 對于貼壁生長的細胞：①靜置后顯微鏡下觀察細胞生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在運輸過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。②若細胞密度未超過80%，可去除培養(yǎng)瓶中舊液（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中），加入新的完全培養(yǎng)基5mL，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（若培養(yǎng)瓶為密封瓶蓋須擰松瓶蓋）。③若細胞密度超過80%，請立即傳代（若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收），首次傳代，建議 1:2 傳代（兩個T25）。

細胞培養(yǎng)操作說明

一、細胞復蘇

1. 將含有1mL細胞懸液的凍存管快速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃加速溶解，直至凍存管中無結晶，然后用75%酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內容物加入含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，補加 4—6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻，接種于T25培養(yǎng)瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。

4. 第二天換液并檢查細胞密度。

注意：在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和佩戴防護面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細胞傳代：細胞密度達80%～90%，即可進行傳代

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1—2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1—2mL，T75瓶2—3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化2—3min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后，加 5mL 以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出至離心管中，1000rpm 離心 5—8min，棄去上清液，補加 1—2mL 完全培養(yǎng)基后吹勻。

4. 按5—6mL/瓶補加完全培養(yǎng)基，將細胞懸液按1:2 ~ 1:3 的比例分到新的含 5-6 mL 完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中或者培養(yǎng)瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

三、細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。步驟如下：

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/mL。

2. 1000rpm離心3—5min，去掉上清，用細胞凍存液重懸細胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞放入-80℃冰箱中，24h后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。