A20小鼠B細胞淋巴瘤細胞

產(chǎn)品編號：CL-113m

細胞介紹

A20 [A-20]是一種BALB/c B細胞淋巴瘤細胞系，來源于在一只老年BALB/cAnN小鼠中發(fā)現(xiàn)的自發(fā)性網(wǎng)狀細胞腫瘤,當細胞在 Click 培養(yǎng)基中生長時，表面免疫球蛋白表達很少；然而，當它們在 RPMI 1640 培養(yǎng)基中生長時，它們會表達大量。細胞可以呈遞同種異體抗原和蛋白質(zhì)抗原。檢測結果顯示，鼠痘病毒（鼠痘）呈陰性,該細胞系可用于免疫學研究。

細胞特性

來源：小鼠B淋巴細胞瘤

形態(tài)：淋巴母細胞樣，懸浮生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25x1瓶（常溫運輸）/ 2mL凍存管x2支（干冰運輸）

用途：僅供科研使用

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

細胞接收注意事項

收貨當天發(fā)現(xiàn)異常，請在24小時內(nèi)及時聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好!

凍存管形式：收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若長時間不使用，應過夜轉移至液氮。復蘇時每管一次用完不得留存；

T25形式：①收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)，鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100x，200x各一張，觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況），以此做為收貨依據(jù)；②收到的是T25瓶發(fā)貨的細胞，抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。收到的是15mL離心管發(fā)貨的細胞，請將15mL離心管內(nèi)的細胞和上清液1：2分到2個新的T25培養(yǎng)瓶中加入1：1按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基即可。③運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

細胞復蘇、傳代、凍存操作

（一）凍存細胞的復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

（二）細胞傳代

待細胞密度達到80%~90%時，即可進行傳代培養(yǎng)：

懸浮狀態(tài)下生長的細胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細胞的生長狀態(tài)，一般情況下細胞密度維持在1×10^5~1×10^6個/mL（不同細胞對密度要求不同）可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中，1000rpm 離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1：2~1：5的比例進行。

（三）細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：

①　細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×10^7個活細胞/mL；

②　1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1mL凍存液含1×10^6~1×10^7個活細胞/mL分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息；

③　將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

①　所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

②　建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。