P815小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞

產(chǎn)品編號(hào)：CL-074m

細(xì)胞介紹

P815細(xì)胞吞噬小粒乳汁但不吞噬酵母聚糖或卡介苗。 沒有抗體依賴的細(xì)胞毒作用。 硫酸右旋糖苷、LPS或PPD不能抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。 檢測(cè)表明肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性。 在本庫通過支原體檢測(cè)。

細(xì)胞特性

來源：小鼠 肥大細(xì)胞；肥大細(xì)胞瘤

形態(tài)：懸浮，部分輕微貼壁生長(zhǎng)。貼壁細(xì)胞可用刮刀刮下后繼續(xù)培養(yǎng)

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25x1瓶（常溫運(yùn)輸）/ 2mL凍存管x2支（干冰運(yùn)輸）

用途：僅供科研使用

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

細(xì)胞接收注意事項(xiàng)

收貨當(dāng)天發(fā)現(xiàn)異常，請(qǐng)?jiān)?/span>24小時(shí)內(nèi)及時(shí)聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好!

凍存管形式：收貨后及時(shí)置于-80℃冰箱保存，若長(zhǎng)時(shí)間不使用，應(yīng)過夜轉(zhuǎn)移至液氮。復(fù)蘇時(shí)每管一次用完不得留存；

T25形式：①收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h；②請(qǐng)?jiān)?/span>4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為收到細(xì)胞時(shí)的狀態(tài)依據(jù)。③顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況，若細(xì)胞密度在60%以下，需收集T25瓶中的懸浮細(xì)胞離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細(xì)胞生長(zhǎng)70%-90%對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代，傳代時(shí)需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞離心后回收；④運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

注意事項(xiàng)：

①　復(fù)蘇的P815活細(xì)胞收到之后，細(xì)胞多數(shù)呈懸浮狀態(tài)，可能有些許細(xì)胞貼壁。請(qǐng)將全部細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管，將剩下貼壁的細(xì)胞吹打脫壁后（刮刀刮下）一并收集，1000rpm離心5min，加入10-15ml培養(yǎng)液重懸后移植到2個(gè)T25培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)。

②　傳代周期：以20萬細(xì)胞/ mL密度開始培養(yǎng)，并在培養(yǎng)過程中維持細(xì)胞密度在10萬細(xì)胞/毫升到100萬細(xì)胞/mL。

③　傳代比例：以20萬細(xì)胞/毫升密度開始培養(yǎng)，并在培養(yǎng)過程中維持細(xì)胞密度在10萬細(xì)胞/ mL至100萬細(xì)胞/ mL。

細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存操作

（一）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

（二）細(xì)胞傳代

待細(xì)胞密度達(dá)到70%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)：

①　收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤(rùn)洗后細(xì)胞會(huì)脫落所以PBS也要回收到離心管中；

②　加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化；

③　將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來的貼壁細(xì)胞以1000rpm離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

（三）細(xì)胞凍存

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

下面T25瓶為例：

①　細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/mL；

②　1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1mL凍存液含1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/mL分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息；

③　將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)：

①　所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

②　建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。