LLC小鼠Lewis肺癌細胞

產(chǎn)品編號：CL-059m

一、細胞簡介

Lewis肺癌是一種從C57BL小鼠的肺中建立的細胞系，該細胞帶有原發(fā)性Lewis肺癌的植入所致的腫瘤，被廣泛用作轉(zhuǎn)移的模型，可用于研究癌癥化學治療劑的機制。

二、細胞特性

來源：小鼠肺癌組織

形態(tài)：半貼壁生長，混合形態(tài)，有上皮細胞樣，松散貼壁或懸浮有梭形、圓形等細胞形態(tài)

含量：1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/2mL凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

注意：此細胞貼壁不牢，生長前期懸浮細胞較多，后期貼壁細胞較多，建議傳代和換液時回收培養(yǎng)基中懸浮的細胞。

三、完全培養(yǎng)基配制

1) 該細胞完全培養(yǎng)基為：DMEM＋10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清＋1%雙抗

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃；95% Air，5% CO?；濕度為70%～80%

3) 凍存液：推薦使用非程序無血清細胞凍存液（貨號：RC-0102）

四、細胞接收注意事項

1) 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細胞有污染，凍存細胞若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落，請拍照后及時與我們聯(lián)系。

2) 75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于培養(yǎng)箱靜置約2—3h。在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2—3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3) 對于半貼壁半懸浮生長細胞：①靜置后顯微鏡下觀察細胞生長情況，若細胞密度未超過80%，可收集T25瓶中的懸浮細胞，離心后用完全培養(yǎng)基重懸打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。②若細胞密度超過80%，可進行傳代處理，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞。首次傳代，建議 1:2 傳代（兩個T25）。

細胞復蘇、傳代、凍存操作

一、細胞復蘇

1. 將含有1mL細胞懸液的凍存管快速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃加速溶解，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內(nèi)容物加入含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，用1—2mL完全培養(yǎng)基重懸細胞，接種到含有6—8mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 第二天換液并檢查細胞密度。

注意：在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和佩戴防護面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細胞傳代：對于半貼壁半懸浮生長細胞，密度達到70%～90%，即可進行傳代

1. 收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1—2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1—2mL，T75瓶2—3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1—2min（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后，加5mL以上含10%FBS的完全培養(yǎng)基終止消化。

3. 將收集到的懸浮細胞、PBS清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpm離心5min，棄去上清，補加1—2mL培養(yǎng)液后重懸混勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中，添加6—8mL按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1: 2~1: 5的比例進行。

三、細胞凍存：收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/mL。

2. 1000rpm離心3—5min，去掉上清，用細胞凍存液重懸細胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞放入-80℃冰箱中，24h后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。