NIH 3T3 小鼠胚胎成纖維細胞

產品編號：CL-050m

一、細胞簡介

與原始的隨機交配3T3和近交系BALB/c 3T3建株方法一樣，NIH/3T3，是從NIH Swiss小鼠胚胎培養(yǎng)物中建立的高度接觸抑制的連續(xù)細胞株。為了培育在形態(tài)學特征上更適合于進行轉化分析的亞株，建立的NIH/3T3細胞株又進行了五輪以上亞克隆。這株細胞對DNA轉化及轉染研究十分有用。檢測表明肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性。

二、細胞描述

來源：小鼠胚胎

形態(tài)：成纖維細胞樣，貼壁生長

培養(yǎng)條件：氣相：95%AIR，5%CO₂；溫度：37℃；培養(yǎng)箱濕度：70%-80%

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/2mL凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

三、完全培養(yǎng)基配制

該細胞完全培養(yǎng)基為：

DMEM 基礎培養(yǎng)基，86%

小牛血清，10% 

P/S，1% 

MEM NEAA非必需氨基酸，1% 

Sodium Pyruvate丙酮酸鈉，1% 

GlutaMAX-1谷氨酰胺，1%

注意：NIH/3T3細胞對于血清較為敏感，不能使用胎牛血清（FBS）培養(yǎng)該細胞，切勿使細胞生長過密，每周至少傳代2次，保證細胞密度不超過80%。

四、細胞接收注意事項

收貨當天發(fā)現異常，請在24小時內及時聯系客服，逾期視為收貨良好!

凍存管形式：收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若長時間不使用，應過夜轉移至液氮。

T25瓶形式：收貨后于培養(yǎng)箱中靜置2-3h，再對細胞進行常規(guī)操作。請嚴格按照本說明操作，否則造成細胞失活等情形，不予提供補發(fā)服務。

對于貼壁細胞：有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中），加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

注意：運輸用的灌液培養(yǎng)基不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書要求配制新的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后第一次傳代建議使用T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

細胞復蘇、傳代、凍存操作

（一）凍存細胞復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

（二）細胞傳代

細胞密度達到80%時，即可進行傳代培養(yǎng)，步驟如下：

① 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

② 加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4mL含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

③ 輕輕打勻后吸出，1000rpm離心3-5min，棄去上清液。補加1~2mL完全培養(yǎng)基吹勻。將細胞懸液按1：2比例分到2個新的培養(yǎng)瓶中，添加6~8mL完全培養(yǎng)基，置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

（三）細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。以T25瓶為例：

① 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/mL。

② 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用細胞凍存液重懸細胞（推薦使用無血清細胞凍存液，貨號：RC-0102），按每1mL凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

③ 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

① 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

② 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮氣化可能導致容器爆炸或吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。