MT-4人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞

產(chǎn)品編號：CL-317h

一、細(xì)胞特性

來源：白血病

形態(tài)：淋巴母細(xì)胞，圓形，懸浮生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運(yùn)輸）/ 含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管x2（干冰運(yùn)輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

二、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 該細(xì)胞完全培養(yǎng)基為：RPMI-1640＋10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清＋0.05mM β-巰基乙醇＋1%雙抗

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃；95% Air，5% CO?；培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

3) 凍存液：90%血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配

三、收貨注意事項(xiàng)

1) 收到細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細(xì)胞有污染，凍存細(xì)胞若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落，請拍照后及時與我們聯(lián)系。

2) 75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于培養(yǎng)箱靜置約2-3h，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請?jiān)?0X和20×物鏡下，同時給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時提供收到細(xì)胞時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3) 對于懸浮生長的細(xì)胞：若細(xì)胞密度超過80%，則可以根據(jù)以下提供的細(xì)胞培養(yǎng)步驟進(jìn)行傳代或凍存；若細(xì)胞密度未達(dá)到80%，可收集細(xì)胞懸液離心，去除上清，加入 6mL 完全培養(yǎng)基，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1. 將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管快速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃加速溶解，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內(nèi)容物加入到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，補(bǔ)加 4-6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻，接種于T25培養(yǎng)瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。

4. 第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

注意：在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和佩戴防護(hù)面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代

方法一（離心法）：將細(xì)胞懸液收集到離心管中，1000rpm離心5-8min，棄去上清，加入1-2mL完全培養(yǎng)基重懸，按1:2到1:3的比例分配到新的含 5-6 mL 完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿中。

方法二（半量換液法）：將T25瓶豎起來，在培養(yǎng)箱靜置10-20分鐘，肉眼可見大部分細(xì)胞沉在底部，輕輕吸去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起混勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分配到新的含 5-6 mL 完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿或培養(yǎng)瓶中。一般半量換液3次，離心傳代一次。

三、細(xì)胞凍存

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。步驟如下：

1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清，用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL分配到一個凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞放入程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)：

所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。