NCI-H1581人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

產(chǎn)品編號：CL-065h

一、細(xì)胞介紹

NCI-H1581是從患有4期非小細(xì)胞肺癌的44歲白人男性患者的肺中分離出的具有上皮形態(tài)的大細(xì)胞。

二、細(xì)胞特性

來源：肺癌；非小細(xì)胞肺癌

形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁+懸浮生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

注意：細(xì)胞主要生長為帶有一些附著細(xì)胞的圓形細(xì)胞簇的浮動聚集體。簇是活的，而單個細(xì)胞的活力非常低?？梢詫⒏街募?xì)胞搖松。

三、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 該細(xì)胞完全培養(yǎng)基為：RPMI-1640 + 10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清 + 1%雙抗

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃；95% Air，5% CO?

3) 凍存液：90%血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配

四、收貨注意事項

1) 收到細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細(xì)胞有污染，凍存細(xì)胞若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落，請拍照后及時與我們聯(lián)系。

2) 75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于培養(yǎng)箱靜置約2-3h。在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時提供收到細(xì)胞時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3) 對于貼壁+懸浮生長細(xì)胞：①靜置后顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，若細(xì)胞匯合度未超過80%，可收集T25瓶中的懸浮細(xì)胞，離心后用完全培養(yǎng)基重懸打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。②若細(xì)胞匯合度超過80%，可進(jìn)行傳代處理，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞。首次傳代，建議 1:2 傳代（兩個T25）。

細(xì)胞培養(yǎng)操作說明

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1. 將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管快速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃加速溶解，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內(nèi)容物加入到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，用1-2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種到含有6-8mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

注意：在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和佩戴防護(hù)面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細(xì)胞傳代：貼壁+懸浮生長細(xì)胞，密度達(dá)到70%-90%，即可進(jìn)行傳代

1. 收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤洗后細(xì)胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后，加5mL以上含10%FBS的完全培養(yǎng)基終止消化。

3. 將收集到的懸浮細(xì)胞、PBS清洗液中的細(xì)胞和消化下來的貼壁細(xì)胞以1000rpm離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1: 2~1: 5的比例進(jìn)行。

三、細(xì)胞凍存：收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用

1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清，用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL分配到一個凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞放入程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。