MM.1S/LUC 人多發(fā)性骨髓瘤細胞穩(wěn)定表達熒光素酶

產品編號：CL-502h

一、細胞介紹

該細胞系的母細胞株MM.1是從一位對類固醇療法產生抗藥性的多發(fā)性骨髓瘤患者的外周血中建立的。MM.1S是從MM.1中分離出來的，對地塞米松敏感。該細胞復蘇后需要兩周左右才能恢復正常生長。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。

二、細胞特性

來源：人、女性、外周血

形態(tài)：淋巴母細胞樣

生長特性：半貼壁半懸浮

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/2mL凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

三、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 該細胞完全培養(yǎng)基為：RPMI1640培養(yǎng)基 + 10%FBS + 1%雙抗

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃，95% Air，5% CO?

3) 凍存液：90%血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配

四、收貨注意事項

1) 凍存細胞：收貨后檢查干冰融化、凍存管是否破損及瓶蓋脫落情況。如無異常情況，1支凍存管按照說明書要求盡快復蘇，另一支轉入液氮儲存。如果第一支復蘇效果不理想，需及時聯(lián)系反饋，在我方技術指導下復蘇第二支凍存細胞。

2) 復蘇細胞：收到細胞后，用75%酒精擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部，不拆封口膜將培養(yǎng)瓶放入37℃，5%CO?細胞培養(yǎng)箱中靜置2-3h以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后在顯微鏡下觀察細胞生長情況、檢查有無微生物污染現(xiàn)象、拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細胞狀態(tài)，前三天所拍照片將作為售后服務依據(jù)。

3) 對于半貼細胞和貼壁不牢（懸?。?/span>細胞：①靜置后懸浮細胞用離心管收集細胞懸液，1000rpm離心5min。②若細胞密度未超過80%，收集懸浮細胞，加入5mL完全培養(yǎng)基到原培養(yǎng)瓶中，放入37℃，5%CO?細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若培養(yǎng)瓶為密封瓶蓋須擰松瓶蓋。③若細胞密度超過80%，可以根據(jù)細胞培養(yǎng)操作步驟進行傳代或凍存。

細胞培養(yǎng)操作步驟

一、細胞復蘇

1. 將細胞凍存管快速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃加速溶解，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內容物加入到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，用5mL完全培養(yǎng)基重懸細胞沉淀，接種到T25培養(yǎng)瓶（或6cm培養(yǎng)皿），放入37℃，5%CO?細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意：在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和佩戴防護面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細胞傳代（細胞密度達到80%-90%，即可以進行傳代）

1. 懸浮細胞用離心管收集細胞懸液，1000rpm離心5min，棄去上清液。

2. 貼壁細胞用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

3. 加 1-2mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后，加5mL以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

4. 輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心5-8min，棄去上清液。

5. 將懸浮細胞和貼壁細胞收集到的細胞沉淀，加 1-2mL 完全培養(yǎng)基吹打混勻。

6. 按5-6mL/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1:2-1:3的比例分到新的含5-6 mL培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中或者培養(yǎng)瓶中（即1個T25傳代接種至 2-3個T25或2-3個直徑為6cm的培養(yǎng)皿）。

        注意：每傳10代，用嘌呤霉素（4ug/ml）鞏固一下。

三、細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。步驟如下：

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/mL。

2. 收集到的細胞沉淀用細胞凍存液重懸細胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞放入程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。