

人神經干細胞(貼壁培養(yǎng))說明書
產品編號:SC-DRY0105
產品規(guī)格:>1×10?cells
儲存條件:活細胞儲存于25℃~37℃,收到后請立即放入CO2培養(yǎng)箱。
凍存細胞暫存于-80℃冰箱,2周有效期;液氮儲存,6個月有效期。
產品簡介
人神經干細胞是一款即用型人神經干細胞,該細胞是使用人神經干細胞誘導培養(yǎng)試劑盒將hESC/hiPSC細胞進行誘導分化獲得,其具備人神經干細胞的典型特性,具有正常人類染色體核型,同時具有高純度和高擴增能力,且可以分化為神經元細胞、少突膠質細胞和星形膠質細胞等。人神經干細胞可以使用懸浮和貼壁兩種培養(yǎng)方式,本文介紹的是貼壁培養(yǎng)方法。
產品內容
產品編號 | 名稱 | 規(guī)格 | 數量 |
SC-DRY0105 | 人神經干細胞 | 1×10? | 1 |
需要材料
l人神經干細胞(貼壁培養(yǎng))復蘇接種培養(yǎng)基
l人神經干細胞(貼壁培養(yǎng))維持培養(yǎng)基
l人神經干細胞(貼壁培養(yǎng))消化液
l細胞培養(yǎng)級無鈣鎂的PBS溶液
培養(yǎng)材料準備
l人神經干細胞(貼壁培養(yǎng))復蘇接種完全培養(yǎng)基:在室溫解凍神經干細胞復蘇接種(貼壁培養(yǎng))添加劑,吹打混勻,隨后將1mL添加劑加入100mL神經干細胞(貼壁培養(yǎng))復蘇接種基礎培養(yǎng)基形成完全培養(yǎng)基。神經干細胞(貼壁培養(yǎng))復蘇接種完全培養(yǎng)基可在2~8℃穩(wěn)定儲存4周。
l人神經干細胞(貼壁培養(yǎng))維持完全培養(yǎng)基:在室溫解凍神經干細胞(貼壁培養(yǎng))維持添加劑,吹打混勻,隨后將1mL添加劑加入100mL神經干細胞(貼壁培養(yǎng))維持基礎培養(yǎng)基形成完全培養(yǎng)基。神經干細胞(貼壁培養(yǎng))維持完全培養(yǎng)基可在2~8℃穩(wěn)定儲存4周。
注意:神經干細胞(貼壁培養(yǎng))復蘇接種及維持添加劑室溫解凍,可按實際用量對添加劑進行分裝,分裝后重新置于-80~-20℃保存,避免反復凍融。
細胞復蘇
1. 室溫平衡人貼壁神經干細胞(貼壁培養(yǎng))復蘇接種完全培養(yǎng)基。
2. 37℃水浴解凍細胞,小心搖晃使細胞融化至僅剩一小塊冰晶,迅速取出并用75%酒精消毒凍存管外表面,轉移至無菌操作臺中。
3. 將細胞懸液轉移至新的15mL離心管中,緩慢加入4mL人神經干細胞(貼壁培養(yǎng))復蘇接種完全培養(yǎng)基,輕柔吹吸2次混勻。
4. 1000rpm離心5分鐘。
5. 棄上清,加入適量人神經干細胞(貼壁培養(yǎng))復蘇接種完全培養(yǎng)基重懸細胞,輕柔吹吸2次混勻,并接種到準備好的培養(yǎng)皿中,顯微鏡下觀察細胞。
6. 37℃恒溫CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。
7. 棄上清,加入適量的人神經干細胞(貼壁培養(yǎng))維持培養(yǎng)基。
8. 放入37℃恒溫CO2細胞培養(yǎng)箱,2-3天換一次人神經干細胞(貼壁培養(yǎng))維持培養(yǎng)基。
9. 顯微鏡下觀察細胞匯合度達到100%即可傳代。
貼壁人神經干細胞傳代(6孔板1個孔細胞為例):
注:建議長滿后按1:3傳代
1. 室溫平衡NeuroEasy人神經干細胞(貼壁培養(yǎng))復蘇接種完全培養(yǎng)基。
2. 吸去培養(yǎng)皿中上清液,加入無鈣鎂的PBS清洗培養(yǎng)皿。
3. 棄上清,使用無鈣鎂的PBS沖洗細胞,加入1mL/孔(6孔板)人神經干細胞(貼壁培養(yǎng))消化液,37℃消化5~15min,待細胞變圓成單細胞,使用2mL人神經干細胞(貼壁培養(yǎng))維持培養(yǎng)基終止消化,收集細胞于15mL離心管(消化細胞時需要將細胞徹底消化下來,切不可消化不充分而使用移液器暴力吹打)。
4. 1000rpm離心5分鐘。
5. 棄上清,在離心管中加入適量神經干細胞(貼壁培養(yǎng))復蘇接種完全培養(yǎng)基,重懸細胞接種至合適的皿中,并使細胞均勻分布。
6. 37℃恒溫二氧化碳細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。
7. 次日顯微鏡下可觀察到細胞均勻貼壁在培養(yǎng)皿中。
8. 棄上清,更換成人神經干細胞(貼壁培養(yǎng))維持培養(yǎng)基,一般維持培養(yǎng)基可以3天換液一次。
9. 顯微鏡下觀察細胞匯合度達到100%即可凍存/傳代。
細胞凍存
1. 室溫平衡人神經干細胞(貼壁培養(yǎng))復蘇接種完全培養(yǎng)基。
2. 吸去培養(yǎng)皿中上清液,加入無鈣鎂的PBS清洗培養(yǎng)皿。
3. 棄上清,使用無鈣鎂的PBS沖洗細胞,加入1mL/孔(6孔板)人神經干細胞(貼壁培養(yǎng))消化液,37℃消化5~15min,待細胞變圓成單細胞,使用2mL人神經干細胞(貼壁培養(yǎng))維持培養(yǎng)基終止消化,收集細胞于15mL離心管(消化細胞時需要將細胞徹底消化下來,切不可消化不充分而使用移液器暴力吹打)。取出培養(yǎng)皿,加入等體積神經干細胞(貼壁培養(yǎng))復蘇接種完全培養(yǎng)基終止消化,用移液器將貼壁細胞吹打下來,收集于15mL離心管中。
4. 1000rpm離心5分鐘。
5. 棄上清,在離心管中加入無血清細胞凍存液,重懸細胞分裝至凍存管中。
6. 不使用程序化降溫盒,直接放入-80度冰箱凍存細胞即可。
7. 24小時以后可將細胞取出放入液氮中長期儲存。
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