

其它名稱: LLC-GFP; LLC/GFP
產(chǎn)品編號: CL-102m
價格: ¥3000
LLC+GFP小鼠肺癌細(xì)胞綠色熒光標(biāo)記
產(chǎn)品編號:CL-671h
細(xì)胞介紹
Lewis肺癌是一種從C57BL小鼠的肺中建立的細(xì)胞系,該細(xì)胞帶有原發(fā)性Lewis肺癌的植入所致的腫瘤,被廣泛用作轉(zhuǎn)移的模型,可用于研究癌癥化學(xué)治療劑的機(jī)制。該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。
細(xì)胞特性
來源:小鼠肺癌組織
形態(tài):半貼壁生長,混合形態(tài),有上皮細(xì)胞樣,松散貼壁或懸浮有梭形、圓形等細(xì)胞形態(tài)
含量:>1x10?cells
規(guī)格:T25x1瓶(常溫運(yùn)輸)/ 2mL凍存管x2支(干冰運(yùn)輸)
用途:僅供科研使用
細(xì)胞篩選
該細(xì)胞為已經(jīng)構(gòu)建好的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細(xì)胞,隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,其GFP熒光強(qiáng)度會逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度,可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。建議收到細(xì)胞后至少傳3代,凍存留種后再進(jìn)行篩選。
初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時,建議加入終濃度為1ug/mL嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無細(xì)胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/mL嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/mL。若篩選過程中,漂浮細(xì)胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/mL嘌呤霉素時細(xì)胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備
完全培養(yǎng)基 | DMEM-H培養(yǎng)基,89% 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10% 雙抗,1% |
培養(yǎng)條件 | 氣相:95%空氣,5%二氧化碳;溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 |
凍存液 | 90%血清 + 10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配 |
細(xì)胞接收注意事項(xiàng)
收貨當(dāng)天發(fā)現(xiàn)異常,請?jiān)?/span>24小時內(nèi)及時聯(lián)系客服,逾期視為收貨良好!
凍存管形式:收貨后及時置于-80℃冰箱保存,若長時間不使用,應(yīng)過夜轉(zhuǎn)移至液氮。復(fù)蘇時每管一次用完不得留存;
T25形式:①收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁,將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100x,200x各一張,觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況),以此做為收貨依據(jù);②有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。③運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。
細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存操作
(一)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
(二)細(xì)胞傳代
待細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng):
① 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次;
② 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4mL含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化;
③ 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8mL按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
(三)細(xì)胞凍存
收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例:
① 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×10^7個活細(xì)胞/mL;
② 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1mL凍存液含1×10^6~1×10^7個活細(xì)胞/mL分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息;
③ 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項(xiàng):
① 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
② 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會泄漏,并會慢慢充滿液氮。解凍時,液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。
地址:湖北省武漢市東湖高新技術(shù)開發(fā)區(qū)光谷三路778號
自貿(mào)生物創(chuàng)新港9層
郵箱:service@51cells.cn
暫無評價信息!