CHO-K1中國倉鼠卵巢細胞（懸浮細胞）

產(chǎn)品編號：CL-035e

細胞介紹

該細胞株是源自成年中國倉鼠卵巢深入活體組織切片的CHO細胞的亞克隆。

細胞特性

來源：中國倉鼠，雌，卵巢

形態(tài)：上皮細胞，懸浮生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/ 2mL凍存管x2（干冰運輸）

用途：僅供科研使用

細胞馴化前的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件：F12K培養(yǎng)基(SIGMA,貨號N3520，添加NaHCO3 2.5g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度。

細胞株馴化：復(fù)蘇CHO-K1細胞轉(zhuǎn)入T25 cm2細胞培養(yǎng)瓶，以F12K基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加10%血清培養(yǎng)，待細胞長滿單層后，加入 0.25 % 胰蛋白酶消化，傳代至裝有完全培養(yǎng)基的T25 cm2細胞培養(yǎng)瓶（Corning）中繼續(xù)培養(yǎng)，當細胞鋪滿瓶底時，即得貼壁 CHO-K1 細胞。取貼壁CHO-K1 細胞，換液，加入15 mL含血清的完全基和 15 mL無血清CHO-K1專用培養(yǎng)基，2天后吸出一半培養(yǎng)液，加入等量的無血清CHO-K1，每2天重復(fù)一次此操作，直到胎牛血清濃度低于 1 %后，以基礎(chǔ)培養(yǎng)基B001 繼續(xù)培養(yǎng)，即培養(yǎng)基中血清濃度依次以 5 %，2 .5 %，1.25%，0.625 %，0 %降低。細胞在無血清CHO-K1專用培養(yǎng)基中密度達到5 ×106cells/ mL時，即得懸浮 CHO-K1 細胞。培養(yǎng)條件：37℃，5 % CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

細胞接收注意事項

收貨當天發(fā)現(xiàn)異常，請在24小時內(nèi)及時聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好!

凍存管形式：收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若長時間不使用，應(yīng)過夜轉(zhuǎn)移至液氮。

T25形式：①收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-3h（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)，鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100x，200x各一張，觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況），以此做為收貨依據(jù)；②抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。③運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

細胞復(fù)蘇、傳代、凍存操作

（一）凍存細胞的復(fù)蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

（二）細胞傳代

待細胞密度達到80%~90%時，即可進行傳代培養(yǎng)：

第一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

（三）細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：

①　細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×10^7個活細胞/mL；

②　1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1mL凍存液含1×10^6~1×10^7個活細胞/mL分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息；

③　將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

    注意事項：

    ①　所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

    ②　建議在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。