UMNSAH/DF-1雞胚成纖維細胞

產品編號：CL-010e

一、細胞介紹

該細胞是起源于10日齡的ELL-0雞蛋的雞細胞株，自發(fā)永生化。分離原代雞胚成纖維細胞并在培養(yǎng)液中培養(yǎng)；傳代直到衰老；在衰老過程中離心以保持細胞培養(yǎng)在30%到60%匯合度；不衰老的克隆進行鑒定并傳代不少于30次。在軟瓊脂上沒有觀察到克隆增殖，說明這些細胞是永生化而沒有轉化。該細胞可作為病毒增殖、重組蛋白表達和重組病毒生產的基質。

二、細胞特性

來源：雞胚

形態(tài)：成纖維細胞，貼壁生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/2mL凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

三、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 該細胞完全培養(yǎng)基為：DMEM(含1.5g/L NaHCO?)培養(yǎng)基 + 10%FBS + 1%P/S

2) 培養(yǎng)環(huán)境：39℃，95% Air，5% CO?

3) 凍存液：90%血清+10%DMSO，現用現配

注意：細胞凍存后復蘇存活率只有50%左右，建議加大凍存密度。該細胞在低濃度NaHCO?（1.5g/L）的DMEM培養(yǎng)基中生長良好，大部分品牌的DMEM含有較高濃度的NaHCO?（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO?）培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞時需要提高CO?濃度（7%-10%）。

四、收貨注意事項

1) 凍存細胞：收貨后檢查干冰融化、凍存管是否破損及瓶蓋脫落情況。如無異常情況，1支凍存管按照說明書要求盡快復蘇，另一支轉入液氮儲存。如果第一支復蘇效果不理想，需及時聯系反饋，在我方技術指導下復蘇第二支凍存細胞。

2) 復蘇細胞：收到細胞后，用75%酒精擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部，不拆封口膜將培養(yǎng)瓶放入39℃，5%CO?細胞培養(yǎng)箱中靜置2-3h以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后在顯微鏡下觀察細胞生長情況、檢查有無微生物污染現象、拍照記錄不同倍數鏡下細胞狀態(tài)，前三天所拍照片將作為售后服務依據。

3) 對于貼壁的細胞：①靜置后顯微鏡下觀察細胞生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在運輸過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。②若細胞匯合度未超過80%，可去除培養(yǎng)瓶中舊液（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中），加入新的完全培養(yǎng)基5mL，放入39℃，5%CO?細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，若培養(yǎng)瓶為密封瓶蓋須擰松瓶蓋。③若細胞匯合度超過80%，請立即傳代（若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收），首次傳代，建議 1:2 傳代（兩個T25）。

細胞培養(yǎng)操作步驟

一、細胞復蘇

1. 將細胞凍存管快速放入39℃水浴中解凍，輕輕搖晃加速溶解，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內容物加入到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，用5mL完全培養(yǎng)基重懸細胞沉淀，接種到T25培養(yǎng)瓶，放入39℃，5%CO?細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意：在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和佩戴防護面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細胞傳代

1. 細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25% (w/v) 胰蛋白酶- 0.53 mM EDTA 約1mL至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5mL完全培養(yǎng)基終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15mL離心管中，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，細胞沉淀用1-2mL完全培養(yǎng)基重懸，然后按1：2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的完全培養(yǎng)基至5-8mL/瓶，放入39℃，5%CO?細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

三、細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。步驟如下：

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/mL。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清，用細胞凍存液重懸細胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞放入程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。