一.細(xì)胞描述

PBMC（peripheral blood mononuclear cell），外周血單個(gè)核細(xì)胞，顧名思義，其主要細(xì)胞類型為血液里邊具有單個(gè)核的細(xì)胞，主要包括淋巴細(xì)胞（T cell＼B cell），單核細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，樹(shù)突狀細(xì)胞和其他少量細(xì)胞類型。其中淋巴細(xì)胞占很大一部分。體外檢測(cè)淋巴細(xì)胞首先要分離外周血單個(gè)核細(xì)胞。

二.細(xì)胞特性

(1)組織來(lái)源于正常外周血；

(2)PBMC是混合體系，故無(wú)法進(jìn)行純度鑒定，流式細(xì)胞儀檢測(cè)的細(xì)胞表型的平均陽(yáng)性百分比見(jiàn)細(xì)胞的COA（不同個(gè)體的表型分布有差異）；

(3)細(xì)胞復(fù)蘇存活率≥90%；

(4)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：細(xì)胞是混合體系，少量貼壁生長(zhǎng)，大部分懸浮生長(zhǎng)；

(5)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

三.產(chǎn)品用途

本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用，不可應(yīng)用于治療等其他方面。

PBMC復(fù)蘇操作說(shuō)明

1. 水浴鍋預(yù)熱：實(shí)驗(yàn)之前30min前開(kāi)啟水浴鍋，設(shè)置溫度到37℃，將培養(yǎng)基，將緩沖液和培養(yǎng)基 提前預(yù)熱至37℃。 

2. 從液氮罐或干冰運(yùn)輸箱中取出凍存管，用止血鉗或鑷子夾緊管蓋邊緣，將凍存管有細(xì)胞的部分浸到水面以下，緩慢攪動(dòng)，盡量保證管蓋不沒(méi)入水中，避免染菌。解凍時(shí)間參考下列表格，不要過(guò)早把細(xì)胞從水浴鍋中拿出。解凍時(shí)間一定不要過(guò)長(zhǎng)，可以允許有極小的未溶解冰晶漂浮在凍存管中，解凍過(guò)長(zhǎng)會(huì)影響細(xì)胞活性。

3. 用75%酒精噴灑凍存管表面，用無(wú)菌紙擦拭凍存管，轉(zhuǎn)移到生物安全柜中。取出預(yù)熱后的緩沖液用75%酒精噴灑表面，轉(zhuǎn)移到生物安全柜中。 

4. 取一支15mL離心管，加入約6ml緩沖液，用巴氏吸管將凍存細(xì)胞液緩慢轉(zhuǎn)移至裝有緩沖液的離心管內(nèi)。再吸2mL緩沖液潤(rùn)洗凍存管，潤(rùn)洗兩次，至潤(rùn)洗液顏色透明。然后合并到15mL離心管內(nèi)，用巴氏吸管充分吹打混勻。（吹打過(guò)程中注意輕柔緩慢。）

5. 將離心管配平，然后離心。離心參數(shù)為400g-420g，6-8min。離心結(jié)束后，棄去上清液，加適量預(yù)熱緩沖液或基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細(xì)胞密度并取樣計(jì)數(shù)。

6. 根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果再次離心，替換培養(yǎng)基；或加入培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度至實(shí)驗(yàn)條件。