LLC/RFP小鼠肺癌細(xì)胞紅色熒光標(biāo)記

產(chǎn)品編號：CL-226m

一、細(xì)胞介紹

Lewis肺癌是一種從C57BL小鼠的肺中建立的細(xì)胞系，該細(xì)胞帶有原發(fā)性Lewis肺癌的植入所致的腫瘤，被廣泛用作轉(zhuǎn)移的模型，可用于研究癌癥化學(xué)治療劑的機(jī)制。該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶RFP基因。

二、細(xì)胞特性

來源：小鼠肺癌組織

形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/2mL凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途
注意：每傳10代左右，用嘌呤霉素（4ug/mL）鞏固一下。

三、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 該細(xì)胞完全培養(yǎng)基為：DMEM培養(yǎng)基 + 10%FBS + 1%雙抗

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃，95% Air，5% CO?

3) 凍存液：推薦使用非程序無血清細(xì)胞凍存液（貨號：RC-0102）

四、收貨注意事項

1) 收到細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細(xì)胞有污染，凍存細(xì)胞若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落，請拍照后及時與我們聯(lián)系。

2) 75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時提供收到細(xì)胞時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3) 對于貼壁生長的細(xì)胞：①靜置后顯微鏡下觀察細(xì)胞生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在運輸過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。②若細(xì)胞匯合度未超過80%，可去除培養(yǎng)瓶中舊液（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中），加入新的完全培養(yǎng)基5mL，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（若培養(yǎng)瓶為密封瓶蓋須擰松瓶蓋）。③若細(xì)胞匯合度超過80%，請立即傳代（若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收），首次傳代，建議 1:2 傳代（兩個T25）。

細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1. 將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管快速放入37℃水浴中，搖晃凍存管加速解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內(nèi)容物加入到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，補(bǔ)加 4-6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻，接種于T25培養(yǎng)瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。

4. 第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

注意：在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和佩戴防護(hù)面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)80%～90%，即可進(jìn)行傳代

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化2-3min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后，加 5mL 以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出至離心管中，1000rpm 離心 5-8min，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 完全培養(yǎng)基后吹勻。

4. 按5-6mL/瓶補(bǔ)加完全培養(yǎng)基，將細(xì)胞懸液按 1:2 ~ 1:3 的比例分到新的含 5-6 mL 完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中或者培養(yǎng)瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（1:2傳代表示1個T25培養(yǎng)瓶傳2個T25或2個直徑為6cm的培養(yǎng)皿）。

三、細(xì)胞凍存

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。步驟如下：

1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清，用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL分配到一個凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞放入-80℃冰箱中，24h后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。