NCI-H446/LUC 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記

產(chǎn)品編號(hào)：CL-757h

一、 細(xì)胞簡(jiǎn)介

該細(xì)胞是1982年由CarneyD和GazdarAF等從一位小細(xì)胞肺癌患者的胸腔積液中建立的。細(xì)胞的原始形態(tài)并不具有小細(xì)胞肺癌特征。這個(gè)細(xì)胞株是小細(xì)胞肺癌的生化和形態(tài)學(xué)上的變種，表達(dá)神經(jīng)元特有的烯醇酶和腦型肌酸激酶同工酶；左旋多巴脫羧酶、蠶素、抗利尿激素、催產(chǎn)素或胃泌激素釋放肽未達(dá)到可檢測(cè)水平。與正常細(xì)胞相比，該細(xì)胞c-mycDNA序列擴(kuò)增約20倍，RNA增加15倍。最初傳代培養(yǎng)基用含有5%FBS。

二、細(xì)胞特性

來(lái)源：肺；轉(zhuǎn)移灶：肋膜滲出癌；小細(xì)胞肺癌

形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，半貼壁半懸浮生長(zhǎng)

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運(yùn)輸）/ 含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管x2（干冰運(yùn)輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用，不可用于動(dòng)物或人類治療或診斷用途

注意：每傳 10 代左右，用嘌呤霉素（4ug/ml）鞏固一下。

三、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

      1) 該細(xì)胞完全培養(yǎng)基為：RPMI-1640+ 20%FBS + 1%P/S。

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃；95% Air，5% CO?

3) 凍存液：推薦使用非程序無(wú)血清細(xì)胞凍存液（貨號(hào)：RC-0102）

四、收貨注意事項(xiàng)

1) 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細(xì)胞有污染，凍存細(xì)胞若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落，請(qǐng)拍照后及時(shí)與我們聯(lián)系。

2) 75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3) 對(duì)于半貼壁半懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞：①靜置后顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，可收集T25瓶中的懸浮細(xì)胞，離心后用完全培養(yǎng)基重懸打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。②若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可進(jìn)行傳代處理，傳代時(shí)需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞。首次傳代，建議 1:2 傳代（兩個(gè)T25）。

細(xì)胞培養(yǎng)操作說(shuō)明

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1. 將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管快速放入37℃水浴中，搖晃凍存管加速解凍，直至凍存管中無(wú)結(jié)晶，然后用75%酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內(nèi)容物加入到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，補(bǔ)加 4-6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻，接種于T25培養(yǎng)瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜。

4. 第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

注意：在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和佩戴防護(hù)面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)80%～90%，即可進(jìn)行傳代

1. 懸浮細(xì)胞用離心管收集細(xì)胞懸液，1000rpm 離心 5min，棄去上清液；

2. 貼壁細(xì)胞用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次；

3. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化2-3min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后，加 5mL 以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化；

4. 輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出至離心管中，1000rpm 離心 5-8min，棄去上清液；

5. 將懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞收集到的細(xì)胞沉淀，加 1-2mL 完全培養(yǎng)基吹打混勻；

6. 按5-6mL/瓶補(bǔ)加完全培養(yǎng)基，將細(xì)胞懸液按 1:2 的比例分到新的含 5-6 mL 完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中或者培養(yǎng)瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

三、細(xì)胞凍存

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。步驟如下：

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/mL。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清，用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/mL分配到一個(gè)凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞放入-80℃冰箱中，24h后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)：

所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全柜內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。