

其它名稱: H2227; H-2227; NCIH2227
產(chǎn)品編號: CL-699h
價格: ¥2500
NCI-H2227人小細胞肺癌細胞
產(chǎn)品編號:CL-699h
一、細胞介紹
NCI-H2227 [H2227] 是從一個 54 歲的白人病人身上分離出來的細胞系。本產(chǎn)品已應(yīng)用于癌癥研究。該患者是一名年七十包的吸煙者。
二、細胞特性
來源:54歲的白人 男性 肺
形態(tài):上皮細胞樣,貼壁生長混合懸浮生長
含量:>1x10?cells
規(guī)格:T25瓶x1(常溫運輸)/含有1mL細胞懸液的凍存管x2(干冰運輸)
用途:本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用,不可用于動物或人類治療或診斷用途
三、完全培養(yǎng)基及凍存液配制
1) 該細胞完全培養(yǎng)基為:DMEM/F12 + 5%優(yōu)質(zhì)胎牛血清 + 1%雙抗+1%GlutaMAX-1谷氨酰胺+1%ITS(胰島素+轉(zhuǎn)鐵蛋白+硒)+10nM氫化可的松+10nMβ-雌二醇
2) 培養(yǎng)環(huán)境:37℃;95% Air,5% CO?;濕度為70%-80%
3) 凍存液:90%血清+10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配
四、收貨注意事項
1) 收到細胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細胞有污染,凍存細胞若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,請拍照后及時與我們聯(lián)系。
2) 75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于培養(yǎng)箱靜置約2-3h。在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時,最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3) 對于貼壁+懸浮生長細胞:①靜置后顯微鏡下觀察細胞生長情況,若細胞匯合度未超過80%,可收集T25瓶中的懸浮細胞,離心后用完全培養(yǎng)基重懸打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。②若細胞匯合度超過80%,可進行傳代處理,傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞。首次傳代,建議 1:2 傳代(兩個T25)。
細胞培養(yǎng)操作說明
一、細胞復蘇
1. 將含有1mL細胞懸液的凍存管快速放入37℃水浴中解凍,輕輕搖晃加速溶解,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%酒精擦拭凍存管外壁。
2. 將凍存管內(nèi)容物加入到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,1000rpm離心5min。
3. 棄去上清液,用1-2mL完全培養(yǎng)基重懸細胞,接種到含有6-8mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中,放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 第二天換液并檢查細胞密度。
注意:在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和佩戴防護面罩,避免凍存管爆炸造成人員傷害。
二、細胞傳代:貼壁+懸浮生長細胞,密度達到70%-90%,即可進行傳代
1. 收集:將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后,加5mL以上含10%FBS的完全培養(yǎng)基終止消化。
3. 將收集到的懸浮細胞、PBS清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpm離心5min,棄去上清,補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8mL按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1: 2~1: 5的比例進行。
三、細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用
1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/mL。
2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清,用細胞凍存液重懸細胞,按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/mL分配到一個凍存管中,標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3. 將要凍存的細胞放入程序降溫盒中,-80℃冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項:
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全柜內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
地址:湖北省武漢市東湖高新技術(shù)開發(fā)區(qū)光谷三路778號
自貿(mào)生物創(chuàng)新港9層
郵箱:service@51cells.cn
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