NCI-H1568人非小細胞肺癌細胞

產(chǎn)品編號：CL-053h

一、細胞簡介

此細胞株源自一位48歲患有非小細胞肺癌的白人女性的淋巴結。該病人吸煙，每年60包。

STR鑒定結果為：Amelogenin: X;CSF1PO: 11;D13S317: 11;D16S539: 10,12;D5S818: 9;D7S820: 8,9;TH01: 9;TPOX: 8,11;vWA: 16,17。

二、細胞特性

來源：女性，48歲，肺; 來源于轉(zhuǎn)移部位：淋巴結

形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/2mL凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

三、完全培養(yǎng)基配制

1) 該細胞完全培養(yǎng)基為：RPMI-1640＋10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清＋1% GlutaMAX-1谷氨酰胺＋1% Sodium Pyruvate丙酮酸鈉＋1%雙抗

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃；95% Air，5% CO?

3) 凍存液：90%血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配

四、細胞接收注意事項

1) 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細胞有污染，凍存細胞若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落，請拍照后及時與我們聯(lián)系。

2) 75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于培養(yǎng)箱靜置約2-3h。在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3) 對于貼壁生長的細胞：①靜置后顯微鏡下觀察細胞生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在運輸過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。②若細胞匯合度未超過80%，可去除培養(yǎng)瓶中舊液（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中），加入新的完全培養(yǎng)基6-8mL，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（若培養(yǎng)瓶為密封瓶蓋須擰松瓶蓋）。③若細胞匯合度超過80%，可進行傳代處理（若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收），首次傳代，建議 1:2 傳代（兩個T25）。

細胞培養(yǎng)操作步驟

一、細胞復蘇

1. 將含有1mL細胞懸液的凍存管快速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃加速溶解，直至凍存管中無結晶，然后用75%酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內(nèi)容物加入到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，用1-2mL完全培養(yǎng)基重懸細胞，接種到含有6-8mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 第二天換液并檢查細胞密度。

注意：在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和佩戴防護面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細胞傳代：細胞密度達80%-90%，即可進行傳代

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后，加5mL以上含10%FBS的完全培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL新的完全培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

三、細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。步驟如下：

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/mL。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清，用細胞凍存液重懸細胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞放入程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。