NCI-H146人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

產(chǎn)品編號(hào)：CL-030h

一、細(xì)胞介紹

細(xì)胞表達(dá)相對大量的c-myc mRNA，但c-myc DNA序列不擴(kuò)增。表達(dá)c-myb, v-fms, Ha-ras, Ki-ras, N-ras, c-raf 1 mRNAs。該細(xì)胞高表達(dá)四種生化標(biāo)記物：神經(jīng)元特異性烯醇酶(neuron specific enolase)、肌酸激酶的腦同工酶(brain isoenzyme of creatine kinase)、L-DOPA脫羧酶(L-DOPA decarboxylase)和類蛙皮素免疫活性(bombesin-like immunoreactivity)。

STR鑒定結(jié)果為：Amelogenin: X, X；CSF1PO: 11,12；D13S317: 11,12；D16S539: 11,11；D5S818: 12,12；D7S820: 9,10；TH01: 6,9.3；TPOX: 8,11；vWA: 14,16。

二、細(xì)胞特性

來源：男性，59歲，肺；來源于轉(zhuǎn)移灶：骨髓

形態(tài)：懸浮生長，多個(gè)細(xì)胞聚團(tuán)

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運(yùn)輸）/ 含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管x2（干冰運(yùn)輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用，不可用于動(dòng)物或人類治療或診斷用途

三、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 該細(xì)胞完全培養(yǎng)基為：RPMI-1640＋10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清＋1% GlutaMAX-1谷氨酰胺＋1% Sodium Pyruvate丙酮酸鈉＋1%雙抗

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃；95% Air，5% CO?

3) 凍存液：90%血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配

四、收貨注意事項(xiàng)

1) 收到細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細(xì)胞有污染，凍存細(xì)胞若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落，請拍照后及時(shí)與我們聯(lián)系。

2) 75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于培養(yǎng)箱靜置約2-3h。在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請?jiān)?0X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3) 對于懸浮生長的細(xì)胞：靜置后，抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞，1000rpm離心5分鐘，棄去上清，重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。

細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1. 將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管快速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃加速溶解，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內(nèi)容物加入到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，用1-2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種到含有6-8mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

注意：在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和佩戴防護(hù)面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代

懸浮狀態(tài)下生長的細(xì)胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長狀態(tài)，一般情況下細(xì)胞密度維持在1×10?~1×10?個(gè)/mL（不同細(xì)胞對密度要求不同）可以維持細(xì)胞的正常生長。

如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

三、細(xì)胞凍存

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。步驟如下：

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/mL。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清，用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/mL分配到一個(gè)凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞放入程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)：

所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全柜內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。