L-02人正常肝細胞

產(chǎn)品編號：CL-010h

一、細胞介紹

L-02細胞建系鑒定于1980年（葉秀珍等，1980)。該細胞是一株正常肝細胞系，具有典型的肝細胞形態(tài)學(xué)特征，可用于多種實驗研究。該株細胞DNA分型在細胞系檢索中找到基本匹配的細胞系，DSMZ數(shù)據(jù)庫顯示細胞名為L-02，細胞號對應(yīng)CVCL_6926。Problematic cell line: Contaminated. Shown to be a HeLa derivative (PubMed=26116706). Originally thought to originate from a normal fetal liver.

二、細胞特性

來源：人正常肝組織

形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/2mL凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

三、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 該細胞完全培養(yǎng)基為：RPMI-1640培養(yǎng)基 + 10%FBS + 1%雙抗。

2) 培養(yǎng)環(huán)境：氣相：5%CO?+95%AIR；溫度：37℃；培養(yǎng)箱濕度：70-80%。

3) 凍存液：90%血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

四、收貨注意事項

1) 凍存細胞：收貨后檢查干冰融化、凍存管是否破損及瓶蓋脫落情況。如無異常情況，1支凍存管按照說明書要求盡快復(fù)蘇，另一支-80℃冰箱過夜后轉(zhuǎn)入液氮保存，如果第一支復(fù)蘇效果不理想，需及時聯(lián)系反饋，在我方技術(shù)指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支凍存細胞。

2) 復(fù)蘇細胞：收到細胞后，用75%酒精消毒瓶壁，將培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中靜置2-3h以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后在顯微鏡下觀察細胞生長情況、檢查有無微生物污染現(xiàn)象、拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細胞狀態(tài)，前三天所拍照片將作為售后服務(wù)依據(jù)。

3) 對于貼壁的細胞：①顯微鏡下觀察細胞生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在運輸過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。②鏡下觀察細胞生長密度若<80%，可去除培養(yǎng)瓶中舊液（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中），加入新的完全培養(yǎng)基6-8mL，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，若培養(yǎng)瓶為密封瓶蓋須擰松瓶蓋。③如果細胞已經(jīng)長滿請立即傳代（若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收）。

細胞培養(yǎng)操作步驟

一、細胞復(fù)蘇

將凍存管從液氮或-80℃中取出放入PE手套中，迅速沒入37℃水浴鍋，搖晃凍存管加速溶解，以1min內(nèi)全部溶解為宜，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8mL完全培養(yǎng)基的T25培養(yǎng)瓶（或6cm皿）中，37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

注意：在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和佩戴防護面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細胞傳代

細胞密度達到80%-90%時，即可進行傳代，步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入1-2mL胰蛋白酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA）至培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4mL含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3. 輕輕打勻后吸出，1000rpm離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按      1: 2比例分到2個新的T25瓶中，添加6-8mL/瓶完全培養(yǎng)基，置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1: 2~1: 5的比例進行。

三、細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。步驟如下：

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/mL。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清，用細胞凍存液重懸細胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。