SRA01/04人晶狀體上皮細(xì)胞

產(chǎn)品編號：CL-136h

一、細(xì)胞簡介

Group: Patented cell line.

Registration: International Depositary Authority, Japanese National Institute of Bioscience and Human-Technology, Agency of Industrial Science and Technology; FERM BP-5454.

Transformant: NCBI_TaxID; 1891767; Simian virus 40 (SV40).

Miscellaneous: Formerly the CCRID database had an entry describing this cell line (3111C0001CCC000206). It was one of the sources for the STR profile of this entry.

Derived from site: In situ; Eye, ocular lens, epithelium;

Cell type: Epithelial cell of ocular lens。

二、細(xì)胞描述

來源：人眼睛

形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長

培養(yǎng)條件：氣相：95%AIR，5%CO₂；溫度：37℃；培養(yǎng)箱濕度：70%-80%

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/2mL凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

三、完全培養(yǎng)基配制

該細(xì)胞完全培養(yǎng)基為：

DMEM-H基礎(chǔ)培養(yǎng)基 + 20%FBS + 1%P/S。

四、細(xì)胞接收注意事項

收貨當(dāng)天發(fā)現(xiàn)異常，請在24小時內(nèi)及時聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好!

凍存管形式：收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若長時間不使用，應(yīng)過夜轉(zhuǎn)移至液氮。

T25瓶形式：收貨后于培養(yǎng)箱中靜置2-3h，再對細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)操作。請嚴(yán)格按照本說明操作，否則造成細(xì)胞失活等情形，不予提供補發(fā)服務(wù)。

對于貼壁細(xì)胞：有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中），加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

注意：運輸用的灌液培養(yǎng)基不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書要求配制新的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后第一次傳代建議使用T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存操作

（一）凍存細(xì)胞復(fù)蘇

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

（二）細(xì)胞傳代

細(xì)胞密度達(dá)到80%時，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)，步驟如下：

① 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

② 加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4mL含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

③ 輕輕打勻后吸出，1000rpm離心3-5min，棄去上清液。補加1~2mL完全培養(yǎng)基吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2比例分到2個新的培養(yǎng)瓶中，添加6~8mL完全培養(yǎng)基，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

（三）細(xì)胞凍存

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。以T25瓶為例：

① 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL。

② 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞（推薦使用無血清細(xì)胞凍存液，貨號：RC-0102），按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL分配到一個凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

③ 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

① 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

② 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮氣化可能導(dǎo)致容器爆炸或吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。