人神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）說明書

產(chǎn)品編號(hào)：SC-DRY0105

產(chǎn)品規(guī)格：>1×10?cells

儲(chǔ)存條件：活細(xì)胞儲(chǔ)存于25℃～37℃，收到后請(qǐng)立即放入CO₂培養(yǎng)箱。

凍存細(xì)胞暫存于-80℃冰箱，2周有效期；液氮儲(chǔ)存，6個(gè)月有效期。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

人神經(jīng)干細(xì)胞是一款即用型人神經(jīng)干細(xì)胞，該細(xì)胞是使用人神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)試劑盒將hESC/hiPSC細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化獲得，其具備人神經(jīng)干細(xì)胞的典型特性，具有正常人類染色體核型，同時(shí)具有高純度和高擴(kuò)增能力，且可以分化為神經(jīng)元細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞等。人神經(jīng)干細(xì)胞可以使用懸浮和貼壁兩種培養(yǎng)方式，本文介紹的是貼壁培養(yǎng)方法。

產(chǎn)品內(nèi)容

需要材料

l人神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種培養(yǎng)基

l人神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）維持培養(yǎng)基

l人神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）消化液

l細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)無鈣鎂的PBS溶液

培養(yǎng)材料準(zhǔn)備

l人神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種完全培養(yǎng)基：在室溫解凍神經(jīng)干細(xì)胞復(fù)蘇接種（貼壁培養(yǎng)）添加劑，吹打混勻，隨后將1mL添加劑加入100mL神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種基礎(chǔ)培養(yǎng)基形成完全培養(yǎng)基。神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種完全培養(yǎng)基可在2~8℃穩(wěn)定儲(chǔ)存4周。

l人神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）維持完全培養(yǎng)基：在室溫解凍神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）維持添加劑，吹打混勻，隨后將1mL添加劑加入100mL神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）維持基礎(chǔ)培養(yǎng)基形成完全培養(yǎng)基。神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）維持完全培養(yǎng)基可在2~8℃穩(wěn)定儲(chǔ)存4周。

        注意：神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種及維持添加劑室溫解凍，可按實(shí)際用量對(duì)添加劑進(jìn)行分裝，分裝后重新置于-80~-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

細(xì)胞復(fù)蘇

1. 室溫平衡人貼壁神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種完全培養(yǎng)基。

2. 37℃水浴解凍細(xì)胞，小心搖晃使細(xì)胞融化至僅剩一小塊冰晶，迅速取出并用75%酒精消毒凍存管外表面，轉(zhuǎn)移至無菌操作臺(tái)中。

3. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至新的15mL離心管中，緩慢加入4mL人神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種完全培養(yǎng)基，輕柔吹吸2次混勻。

4. 1000rpm離心5分鐘。

5. 棄上清，加入適量人神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，輕柔吹吸2次混勻，并接種到準(zhǔn)備好的培養(yǎng)皿中，顯微鏡下觀察細(xì)胞。

6. 37℃恒溫CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。

7. 棄上清，加入適量的人神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）維持培養(yǎng)基。

8. 放入37℃恒溫CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱，2-3天換一次人神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）維持培養(yǎng)基。

9. 顯微鏡下觀察細(xì)胞匯合度達(dá)到100%即可傳代。

    貼壁人神經(jīng)干細(xì)胞傳代(6孔板1個(gè)孔細(xì)胞為例)：

注：建議長(zhǎng)滿后按1：3傳代

1. 室溫平衡NeuroEasy人神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種完全培養(yǎng)基。

2. 吸去培養(yǎng)皿中上清液，加入無鈣鎂的PBS清洗培養(yǎng)皿。

3. 棄上清，使用無鈣鎂的PBS沖洗細(xì)胞，加入1mL/孔（6孔板）人神經(jīng)干細(xì)胞(貼壁培養(yǎng))消化液，37℃消化5~15min,待細(xì)胞變圓成單細(xì)胞，使用2mL人神經(jīng)干細(xì)胞(貼壁培養(yǎng))維持培養(yǎng)基終止消化，收集細(xì)胞于15mL離心管（消化細(xì)胞時(shí)需要將細(xì)胞徹底消化下來，切不可消化不充分而使用移液器暴力吹打）。

4. 1000rpm離心5分鐘。

5. 棄上清，在離心管中加入適量神經(jīng)干細(xì)胞(貼壁培養(yǎng))復(fù)蘇接種完全培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞接種至合適的皿中，并使細(xì)胞均勻分布。

6. 37℃恒溫二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。

7. 次日顯微鏡下可觀察到細(xì)胞均勻貼壁在培養(yǎng)皿中。

8. 棄上清，更換成人神經(jīng)干細(xì)胞(貼壁培養(yǎng))維持培養(yǎng)基，一般維持培養(yǎng)基可以3天換液一次。

9. 顯微鏡下觀察細(xì)胞匯合度達(dá)到100%即可凍存/傳代。

細(xì)胞凍存

1. 室溫平衡人神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種完全培養(yǎng)基。

2. 吸去培養(yǎng)皿中上清液，加入無鈣鎂的PBS清洗培養(yǎng)皿。

3. 棄上清，使用無鈣鎂的PBS沖洗細(xì)胞，加入1mL/孔（6孔板）人神經(jīng)干細(xì)胞(貼壁培養(yǎng))消化液，37℃消化5~15min,待細(xì)胞變圓成單細(xì)胞，使用2mL人神經(jīng)干細(xì)胞(貼壁培養(yǎng))維持培養(yǎng)基終止消化，收集細(xì)胞于15mL離心管（消化細(xì)胞時(shí)需要將細(xì)胞徹底消化下來，切不可消化不充分而使用移液器暴力吹打）。取出培養(yǎng)皿，加入等體積神經(jīng)干細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)）復(fù)蘇接種完全培養(yǎng)基終止消化，用移液器將貼壁細(xì)胞吹打下來，收集于15mL離心管中。

4. 1000rpm離心5分鐘。

5. 棄上清，在離心管中加入無血清細(xì)胞凍存液，重懸細(xì)胞分裝至凍存管中。

6. 不使用程序化降溫盒，直接放入-80度冰箱凍存細(xì)胞即可。

7. 24小時(shí)以后可將細(xì)胞取出放入液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存。